[发明专利]自组装多肽d-RADA16-RGD及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种自组装多肽d-RADA16-RGD，其特征在于，所述多肽序列为：Ac-(Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala)₂-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-CONH₂；组成所述多肽的氨基酸均为右旋氨基酸。

2.一种自组装多肽d-RADA16-RGD的制备方法，其特征在于，肽链合成采用Fmoc/PyBOP方法，在合成仪上将Rink Amide树脂置于反应容器，加入芴甲氧羰基-氨基酸进行反应，一个氨基酸拼接完成后，再拼接下一个氨基酸，所述芴甲氧羰基-氨基酸的加入顺序按照所述多肽序列从C端的顺序加入，每个芴甲氧羰基-氨基酸加入同时，加入与所述芴甲氧羰基-氨基酸等量的六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷试剂、1-羟基苯并三唑试剂和甲基吗啉试剂；组成所述多肽的氨基酸均为右旋氨基酸。

3.如权利要求 2所述的自组装多肽d-RADA16-RGD的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)用N,N-二甲基甲酰胺浸泡所述反应容器中的Rink Amide树脂，浸泡洗涤后加入相同摩尔的第一个氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH、所述六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷试剂、1-羟基苯并三唑试剂和甲基吗啉试剂，反应20分钟；

2)然后用N,N-二甲基甲酰胺洗涤，再加入六氢吡啶溶液，浸泡，再用N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷洗涤所述Rink Amide树脂；

3)取反应的第二个氨基酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH和相同摩尔的所述六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷试剂、1-羟基苯并三唑试剂和甲基吗啉试剂，一起加入到已经脱掉芴甲氧羰基基团的Lys-Merrifield resin中，反应20分钟；

4)重复步骤2)；

5)选择芴甲氧羰基-氨基酸，重复步骤3)和步骤4)，进行22个循环；

6)接完多肽的所述Rink Amide树脂用甲醇清洗后干燥，然后加入无水甲醇并冰浴到-20℃，通入氨气，保持温度低于0℃，通入氨气时间为90分钟，然后密封振摇24小时取出，过滤收集滤液并浓缩抽干，再加入配好并预冷的切肽试剂，25℃下搅拌反应3小时，取出过滤，收集滤液；所述Rink Amide树脂用三氟乙酸洗涤，将洗涤液与所述滤液合并，浓缩后冷却，然后加入冷乙醚使多肽沉淀，离心收集沉淀，真空干燥，得粗品；

7)将所述粗品用高效液相色谱法纯化后即得。

4.如权利要求 3所述的自组装多肽d-RADA16-RGD的制备方法，其特征在于，所述切肽试剂包括：三氟乙酸、苯硫基甲烷、苯酚、水、乙二硫醇和三异丙基硅烷。

5.如权利要求 4所述的自组装多肽d-RADA16-RGD的制备方法，其特征在于，所述切肽试剂以质量百分比计包括：81.5％的三氟乙酸、5％的苯硫基甲烷、5％的苯酚、5％的水、2.5％的乙二硫醇和1％的三异丙基硅烷。

6.如权利要求 5所述的自组装多肽d-RADA16-RGD的制备方法，其特征在于，所述六氢吡啶溶液为30％六氢吡啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液。

7.一种自组装多肽d-RADA16-RGD在制备组织工程材料中的应用，其特征在于，所述多肽序列为：Ac-(Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala)₂-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-CONH₂；组成所述多肽的氨基酸均为右旋氨基酸。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组织工程材料包括人造骨修复材料。