[发明专利]一种具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201610147895.0 | 申请日： | 2016-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN105734050A | 公开（公告）日： | 2016-07-06 |
| 发明（设计）人： | 岳巧云;单振菊;邱德义;陈健;吴可量;刘德星;魏晓雅 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国中山出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 528403 广东省中*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 几丁质 外壳 微小 节肢动物 损伤 凭证 标本 基因组 dna 提取 方法 试剂盒 | ||
1.一种具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取方法，其特征在于，将具厚几丁质外壳微小节肢动物用几丁质酶处理后，然后加入裂解液中裂解后，获得基因组DNA。
2.根据权利要求1所述的具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取方法，其特征在于，所述的裂解液为：100～900mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、质量分数0.5％TritonX-100、质量分数5％Tween-20，溶剂为水。
3.根据权利要求1所述的具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取方法，其特征在于，是将具厚几丁质外壳微小节肢动物放置于含1mg/ml几丁质酶的pH6.0磷酸缓冲液中，25℃消化24小时，然后将消化后的具厚几丁质外壳微小节肢动物放置于裂解液中，56℃裂解24h，获得基因组DNA，所述的裂解液为：700mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、质量分数0.5％TritonX-100、质量分数5％Tween-20，溶剂为水。
4.一种具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取试剂盒，包括DNA提取试剂，其特征在于，还包含几丁质酶工作液和裂解液。
5.根据权利要求4所述的具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的裂解液为：100～900mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、质量分数0.5％TritonX-100、质量分数5％Tween-20，溶剂为水。
6.根据权利要求4所述的具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的几丁质酶工作液是含1mg/ml几丁质酶的pH6.0磷酸缓冲液，所述的裂解液为：700mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、质量分数0.5％TritonX-100、质量分数5％Tween-20，溶剂为水。
7.根据权利要求4所述的具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本的基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的DNA提取试剂盒中还包括洗液A，洗液B、正向引物LCO14905’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’、反向引物HCO21985’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’、dNTP、含Mg2+的10×Buffer和Taq酶。
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