[发明专利]大花萱草“蕾丝方巾”的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及大花萱草“蕾丝方巾”的组织培养方法。

背景技术

大花萱草，百合科萱草属多年生草本植物，萱草花大色繁在少花的夏季盛开，有黄、杏黄、桔黄、胭脂红以及紫色等多种花色，花期长、花量大，同时具有较强的抗旱、抗寒、抗盐碱、抗病虫害、耐半荫等特性。萱草在欧美国家是一种重要的园林植物，是品种最丰富的宿根花卉之一。我国对萱草的研究利用工作起步比较晚，目前成功推广应用的只有“金娃娃”一种，国内种植的萱草品种绝大多数引自国外，这些品种量少价高。萱草结实率低，而且籽播苗生长表现差别极大，品种稳定性低一般不采用种子繁殖，而是采用分蘖无性繁殖方式进行增殖。但由于其速度慢，一般一株大花萱草每年仅可繁殖3～4株，个别品种每年仅繁殖1～2株，因而难以适应市场商品化生产的需求，造成目前优良萱草品种量少价高的现状，严重限制了国内萱草新品种的大面积推广。组织培养方法繁殖具有繁殖周期短，全年都能进行繁殖，繁殖系数高等特点，还可以消除某些病毒病，是解决萱草大量繁殖问题的最有效途径。

发明内容

本发明的目的在于：针对现有技术中存在的上述技术问题，提供一种大花萱草“蕾丝方巾”的组织培养方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

大花萱草“蕾丝方巾”的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得，一年四季均可取大花萱草“蕾丝方巾”茎尖，清洗干净后切成3小块1cm，用4－5％山农一号Ⅰ型溶液浸泡16小时，浸泡液加入1/4MS基本培养基的盐类，基本培养基采用MS基本培养基，其中白糖20g/L、琼脂5g/L，PH5.8，取出后接种在愈伤诱导培养基上；

(2)愈伤诱导：在25±2℃，光强1500—2500Lx，光照12h/d条件下，40天后茎尖可见明显的愈伤组织，暗培养20—30天；

(3)芽分化：将愈伤组织接到芽分化诱导培养基上，在25±2℃，光强1500—2500Lx，光照12h/d条件下，培养25天后开始芽分化形成丛生芽；

(4)复壮培养：将丛生芽转接到壮苗培养基上，在25±2℃，光强1500—2500Lx，光照12h/d条件下，培养20—30天至苗高5cm以上；

(5)生根培养：将壮苗转接到生根培养基上，在25±2℃，光强1500—2500Lx，光照12h/d条件下，培养15天后基部开始长根系；

(6)炼苗与移栽：

①炼苗：将长高至10cm左右、长根≥5根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置3－5天后打开瓶盖，在25—28℃，湿度70—80％，光强7000—8000Lx条件下，炼苗3—5天；

②移栽与培养：将炼苗后的组培苗洗净根部培养基，用0.1％多菌灵溶液浸泡根部30—60秒后，移栽至泥炭与珍珠岩的混合基质中，用塑料薄膜覆盖并盖上遮阴网，在25－30℃，湿度80—95％，光强宜先弱后强条件下，培育1周，后逐渐打开薄膜；2周后进入常规管理，培养1—2月后，即成种苗。

作为优选，所述愈伤诱导培养基为MS+山农一号Ⅱ型0.1％+6—BA1.8—2.3mg/L+NAA0.3—0.6mg/L。

作为优选，所述芽分化诱导培养基为MS+山农一号Ⅱ型0.1％+6—BA3.5—4.5mg/L+NAA0.18—0.2mg/L。

作为优选，所述生根培养基为1/2MS+山农一号Ⅱ型0.1％+IBA0.15—0.2mg/L+NAA0.05—0.1mg/L。

作为优选，所述壮苗培养基为MS+山农一号Ⅱ型0.1％+6—BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L。

作为优选，所述愈伤诱导培养基为MS+山农一号Ⅱ型0.1％+6—BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。

作为优选，所述芽分化诱导培养基为MS+山农一号Ⅱ型0.1％+6—BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L。

作为优选，所述生根培养基为1/2MS+山农一号Ⅱ型0.1％+IBA0.2mg/L+NAA0.1mg/L。

作为优选，所述泥炭与珍珠岩的混合基质中，泥炭与珍珠岩的体积比为7∶3。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

1、本发明以大花萱草“蕾丝方巾”茎尖为外植体，通过外植体消毒和优化愈伤诱导、芽分化、复壮、生根培养基配方和炼苗培养条件，经过愈伤诱导、芽分化、复壮、生根培养及试管苗移栽阶段，实现大花萱草“蕾丝方巾”种苗的快速繁殖，组培苗移栽成活率达98％以上，为大花萱草快速繁殖、推广应用奠定基础。