[发明专利]一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法

权利要求书

1.一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤：

步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末；其中，所述过筛具体为：过50-120目筛；

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量15倍的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2万U，酶解温度为50℃，酶解时间1.5h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入15倍的蒸馏水后，加入7.2万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1-2次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100℃下进行浓缩1-3h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积4倍的无水乙醇，在4℃下醇析12h，进行8000r/min的离心操作20min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物，其中，蜜蜂巢脾多糖提取物的提取率达21.46％。

2.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：

将西方蜜蜂Apis mellifera L.的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末。

3.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：

将西方蜜蜂Apis mellifera L.的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡；

采用乙醚回流脱脂后使用80％v/v乙醇进行脱脂脱单糖处理；

鼓风烘干，得到巢脾干燥粉末。

4.一种根据权利要求1-3任一项所述制备方法获得的蜜蜂巢脾多糖提取物，其特征在于，

所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖、蛋白质、糖醛酸及单糖，且多糖的含量大于50％

5.根据权利要求4所述的蜜蜂巢脾多糖提取物，其特征在于：所述蜜蜂巢脾多糖提取物中，总多糖含量为50-80％。