[发明专利]抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体及其制备方法和应用。具体而言，本发明的嵌合单抗包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中鼠源重链可变区如SEQ ID NO:1所示，鼠源轻链可变区如SEQ ID NO:2所示，人源重链恒定区为选自IgG、IgM、IgA、IgE、IgD中的任意一种的重链恒定区，人源轻链恒定区为选自kappa或lambda中的任意一种的轻链恒定区。本发明的嵌合单抗既能抑制vWF与胶原的结合，又能抑制血小板的聚集，具有良好的抗血栓作用，不易在人体内产生抗鼠的免疫反应，并且大大降低了临床出血风险的发生。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有高特异性、高亲合力结合特性以及高抗血栓活性的抗人血管性血友病因子（vWF）A3区的人鼠嵌合单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

流行病学研究表明，近几十年来，随着物质生活的提高及人口的老龄化，血栓性疾病的危害日益凸显。在特定的病理条件下，血栓能够抑制或者完全阻止血液流动，从而导致细胞性坏死，严重威胁人类健康。

血小板在血栓的形成中起着关键性作用，血小板粘附和聚集是血栓形成的必要过程。发生在动脉粥样硬化斑块处的血小板粘附和聚集以及随后的血栓形成，在心绞痛、急性心肌梗塞以及血管成形术后的血栓再形成等疾病的发病过程中起着重要作用。

近年来，针对血小板在血栓形成过程中的分子机制研究促进了分子靶向药物的发展，其中以针对血小板糖蛋白（GP）IIb/IIIa的单克隆抗体阿昔单抗（abciximab）为代表，临床应用已取得了良好的抗血栓治疗效果。然而，由于阿昔单抗也存在引起严重出血的潜在危险，特别是在亚洲人群中更为严重，因此尚未在亚洲推广应用，在一定程度上阻碍了这类药物的临床应用。

为了克服抗血栓药物存在出血副作用这一缺陷，抗血小板粘附作为新的抗血栓治疗手段正在兴起。血小板与内皮下胶原的粘附是血小板血栓形成的开始步骤，抗血小板粘附药物通过抑制胶原-vWF-血小板GPIb轴来阻断血小板与胶原的起始粘附（即在血栓形成的早期阶段阻止血小板的粘附和活化），可以实现既能对抗血栓形成，又能减少出血副作用的目的。因此，这类药物在对其他血管阻塞以及血栓栓塞性疾病的治疗中具有良好的应用前景。

中国发明专利CN101597595A中公开了针对胶原-vWF-血小板GPIb轴这一新靶点的鼠源性单抗SZ-123和SZ-125，其能够与人以及猕猴血管性血友病因子A3区发生高特异性、高亲合力结合，进而阻止血小板在胶原表面的粘附和活化。但是，由于鼠源性单抗在人体内可能会诱导产生人抗鼠免疫反应，因此这种免疫反应不但会减弱或者破坏治疗效果，甚至可能会在患者体内引起变态反应或超敏反应，极大地限制了临床应用。另外，在治疗血栓栓塞性疾病时，通常需要反复给药，这样就更加增大了上述免疫反应的发生概率。

发明内容

针对上述情况，本发明提供了一种抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体（MHC-SZ123），其不仅能够从血栓形成的早期阶段阻断血栓的形成，而且能够减少药效的降低和出血副作用以及由免疫反应引起的变态反应或超敏反应的发生概率。

具体而言，本发明的抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中：

所述鼠源重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述鼠源轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述人源重链恒定区为选自IgG（γ）、IgM（μ）、IgA（α）、IgE（ε）、IgD（δ）中的任意一种的重链恒定区；

所述人源轻链恒定区为选自kappa（κ）或 lambda（λ）中的任意一种的轻链恒定区。