[发明专利]抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体，其包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中： 所述鼠源重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示； 所述鼠源轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示； 所述人源重链恒定区为选自IgG、IgM、IgA、IgE、IgD中的任意一种的重链恒定区； 所述人源轻链恒定区为选自kappa或lambda中的任意一种的轻链恒定区。

2. 根据权利要求1所述的抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体，其特征在于： 所述人源重链恒定区为选自IgG1、IgG3、IgG4中的任意一种的重链恒定区。

3. 根据权利要求2所述的抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体，其特征在于： 所述人源重链恒定区为IgG1的重链恒定区。

4. 根据权利要求1所述的抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体，其特征在于： 所述人源轻链恒定区为kappa的轻链恒定区。

5.一种根据权利要求1所述的抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法，其包括以下步骤：

1）采用cDNA末端快速扩增技术，利用一对引物HGSP1和KGSP1，以分泌鼠单抗SZ-123的杂交瘤细胞株的mRNA为模版，分别扩增出编码鼠源功能性抗体中重链和轻链可变区的核苷酸序列；其中： 所述引物HGSP1和KGSP1的核苷酸序列分别如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示；

2）采用基因工程的方法，利用两对引物p-VH-F和p-VH-R以及p-VK-F和p-VK-R，分别将步骤1）中获得的编码鼠源抗体中重链和轻链可变区的核苷酸序列与编码人源抗体中重链和轻链恒定区的核苷酸序列对应连接，经测序确认后，获得嵌合单抗的重链和轻链表达载体；其中： 所述引物p-VH-F、p-VH-R、p-VK-F、p-VK-R的核苷酸序列分别如SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示；

3）将步骤2）中获得的表达载体共转染至高效表达目标嵌合单抗的受体细胞，经多次克隆和特异性筛选，获得高效表达目标嵌合单抗的细胞株，收集细胞培养液上清，经纯化获得抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于： 所述高效表达目标嵌合单抗的受体细胞为鼠骨髓瘤细胞或中国仓鼠卵巢细胞。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述高效表达目标嵌合单抗的受体细胞为中国仓鼠卵巢细胞。

8.一种高效表达根据权利要求1所述的抗人血管性血友病因子A3区的人鼠嵌合单克隆抗体的中国仓鼠卵巢细胞株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2015184。