[发明专利]用于大肠杆菌分泌表达重组蛋白的培养基及其制备方法

说明书

本发明属于重组蛋白表达领域，具体涉及一种用于大肠杆菌分泌表达重组蛋白的培养基及其制备方法，本发明培养基中每1000毫升含有：胰蛋白胨12‑16克、酵母提取物6‑10克、D‑山梨醇60‑100克、氯化钠8‑16克、D‑葡萄糖1‑2克、1mol/L Tris‑HCl缓冲液(pH7.2)20‑100毫升、加去离子水至1000毫升。该培养基可促进大肠杆菌通过信号肽向周质空间分泌重组蛋白，促进周质空间中的重组蛋白通过非特异性分泌途径进一步释放到培养基液体中，进而提高大肠杆菌分泌表达重组蛋白的成功率和产量。

技术领域

本发明属于重组蛋白表达领域，具体涉及一种用于大肠杆菌分泌表达重组蛋白的培养基及其制备方法，该培养基可提高大肠杆菌分泌表达重组蛋白成功率和产量。

背景技术

大肠杆菌表达重组蛋白，是将异源目的蛋白的编码基因克隆插入pET系列等高表达载体并转入大肠杆菌细胞内，使大肠杆菌经诱导后大量产生所需的目的蛋白。该技术广泛应用于酶、抗体、疫苗的工业生产，以及科研院校制备科研用重组蛋白。大肠杆菌表达重组蛋白主要有5种方式：

(1)胞内表达：目的蛋白翻译后停留于大肠杆菌细胞质内；

(2)膜定位表达：目的蛋白翻译后经合适的信号肽引导，停留于大肠杆菌内膜上；

(3)周质分泌表达：目的蛋白翻译后经pelB等信号肽引导，从大肠杆菌细胞质运输到内外膜之间的周质空间；

(4)培养基分泌表达：经长时间诱导后，已进入周质空间的目的蛋白可进一步经由非特异性分泌途径穿过大肠杆菌外膜，释放到周围的培养基液体中；

(5)包涵体表达：目的蛋白被不正确地折叠，在大肠杆菌细胞质或周质空间中聚集成不可溶的紧致微粒(包涵体)。

这5种蛋白表达方式中，膜定位表达因表达量较低且难以进行后续纯化，因此实用价值较低。包涵体表达在大部分情况下导致蛋白质变性并失去其正常功能(失活)，虽然在部分情况下可以通过复性使蛋白质恢复正确构象并恢复部分活性，但复性工作量大且蛋白活性无法100％恢复。胞内表达、周质空间表达和培养基分泌表达的实用性较高，但面临的共同困难是目的蛋白可溶性不佳，易在细胞质内或周质空间中聚集，转化为包涵体。虽然可通过共表达可溶性标签等手段提高目的蛋白的可溶性，但需要切除可溶性标签的额外步骤。综上所述，在胞内表达、周质空间表达和培养基分泌表达中提高目的蛋白的可溶性是最常采用的策略。

基于上述应用背景，发明人欲提供一种新的培养基，促进大肠杆菌通过信号肽向周质空间分泌重组蛋白，促进周质空间中的重组蛋白通过非特异性分泌途径进一步释放到培养基液体中。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种用于大肠杆菌分泌表达重组蛋白的培养基，该培养基可促进大肠杆菌通过信号肽向周质空间分泌重组蛋白，促进周质空间中的重组蛋白通过非特异性分泌途径进一步释放到培养基液体中，进而提高大肠杆菌分泌表达重组蛋白的成功率和产量。

本发明培养基中每1000毫升含有：胰蛋白胨12-16克、酵母提取物6-10克、D-山梨醇60-100克、氯化钠8-16克、D-葡萄糖1-2克、1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.2)20-100毫升、加去离子水至1000毫升。

优选的，本发明培养基中每1000毫升含有：胰蛋白胨16克、酵母提取物10克、D-山梨醇100克、氯化钠12克、D-葡萄糖2克、1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.2)100毫升、加去离子水至1000毫升。

本发明培养基的制备方法如下：按照上述比例关系配制培养基，然后按照常规方法灭菌即可。

其中，本发明采用的灭菌方法为：采用高压蒸汽灭菌，即在115℃、0.07MPa压力下灭菌30分钟。