[发明专利]一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物及方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物及方法，该引物序列如SEQ ID NO：1~2所示，其特异性好，该引物对FMDV和SVV进行PCR扩增，然后通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，采集荧光数据，根据两者的熔解曲线不同来鉴别FMDV和SVV；利用所述引物进行PCR扩增后即可鉴别两种基因型，全部操作过程只需3小时，不需要病毒的细胞培养，极大缩短了分型所需时间；费用低，不需要特异性探针，荧光饱和染料廉价易得；准确性高、特异性好，重复性好，可以准确、快速、高通量地进行分析，有利于在临床实践中推广应用。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，涉及一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物及方法。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的急性、热性、高度接触性传染的动物疫病，侵染对象包括猪、牛、羊等主要畜种及其他偶蹄动物。发病猪的特征症状是发热，口鼻、蹄部和母猪乳头发生水泡，突然发生急性跛行，死亡剖检时可见虎斑心和出血性胃肠炎病变。口蹄疫传染性强，发病率高，国际动物卫生组织（OIE）将该病列为A类传染病之首；塞内加谷病毒（Seneca Valley virus SVV）是单股正链RNA病毒，是小核糖核酸病毒科Senecavirus病毒属的典型代表。其最初被认为是PER.C6细胞培养物中的污染物，随后在美国和加拿大的猪群中被分离， 2007年在美国一屠宰场的猪群中出现水疱性疾病临床症状，约80%的猪出现跛足，PCR检测猪口蹄疫、猪水疱病、水疱性口炎和水疱性疹均为阴性，而SVV却为阳性，从而被认为是原发性水疱性疾病。近期猪塞内加谷病毒（SVV）在巴西猪群中的感染与爆发，证明了猪塞内加谷病毒很有可能是猪的原发性水疱性疾病病原之一。2015年我国及巴西出现了几次SVV感染猪群并出现严重的临床发病及死亡症状，造成严重的经济损失。由于该病与口蹄疫的临床症状及解剖症状极为相似，在临床和组织病理学上很难区分，其鉴别诊断通常需借助实验室诊断技术，传统的检测方法费时费力，操作方法繁琐，不利于疾病的及时诊断治疗，造成重大的经济损失。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物。

本发明的第二个目的是提供一种含有上述检测引物的检测试剂盒。

本发明的第三个目的是提供上述检测引物或检测试剂盒的应用。

本发明的第四个目的是提供一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物，该引物为P1和P2，序列如SEQ ID NO：1~2所示。

P1：ACTTTTCTGAAAGATGAAAT（SEQ ID NO：1）。

P2：TTGTCDGCTGGAGTCAT（SEQ ID NO：2）。

本发明通过分析FMDV和SVV基因组，设计得到一对既能扩增FMDV又能扩增SVV的引物，利用该引物对FMDV和SVV进行PCR扩增，然后通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，采集荧光数据，根据两者的熔解曲线不同来鉴别FMDV和SVV。

本发明还提供一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测试剂盒，含有引物P1和P2；优选地，所述引物的浓度为0.5μM。

优选地，所述试剂盒还含有PCR反应缓冲液、荧光染料；更优选地，所述荧光染料为LC Green染料。