[发明专利]一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物及方法有效
| 申请号： | 201610126868.5 | 申请日： | 2016-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN105695628B | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 马静云;郭鹏举;朱余军;伍绮文 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 口蹄疫病毒 猪塞内加谷 病毒 hrm 检测 引物 方法 | ||
1.一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物，其特征在于，该引物为P1和P2，序列如SEQ ID NO：1~2所示。
2.一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述引物。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述引物的浓度为0.5μM。
4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有PCR反应缓冲液、荧光染料。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为LC Green染料。
6.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，使用方法为：从待测样品中提取病毒基因组，利用权利要求1所述引物对模板进行PCR扩增，对扩增产物进行HRM分析，根据HRM曲线鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，当所述模板为RNA时，其PCR扩增的反应体系为：模板 1 µL，2×1-Step Buffer 12.5µL，PrimeScript 1-step Enzyme Mix0.5µL，P1 1µL，P2 1µL，LC Green染料 1µL，用双蒸水补足20µL。
8.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，当所述模板为RNA逆转录的cDNA时，其PCR扩增的反应体系为：模板 2 µL，Premix Ex-Taq 10 µL，P1 1µL，P2 1µL，LC Green染料 1µL，用双蒸水补足20µL。
9.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，其PCR的反应程序为：（i）50℃ 30min；（ii）94℃预变性15min；（iii）94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸45s，步骤（iii）循环35次；（iiii）72℃终延伸10min；80℃到93℃以0.3℃/s的熔解速率进行HRM分析。
10.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，其PCR的反应程序为：（i）94℃预变性5min；（ii）94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸45s，步骤（ii）循环35次；（iii）72℃终延伸10min；80℃到93℃以0.3℃/s的熔解速率进行HRM分析。
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