[发明专利]一种提高植物甲硫氨酸含量的载体及其构建方法和用途

权利要求书

1.一种载体在提高玉米甲硫氨酸和/或半胱胺酸含量的用途，所述载体的核苷酸序列为：将序列表SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列的第8621位至11200位的核苷酸替换为序列表SEQ ID NO.12所示的核苷酸后的核苷酸序列。

2.一种转基因玉米的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将载体导入农杆菌菌株中，活化，备用；所述载体的核苷酸序列为：将序列表SEQ IDNO.14所示的核苷酸序列的第8621位至11200位的核苷酸替换为序列表SEQ ID NO.12所示的核苷酸后的核苷酸序列；

(2)取授粉13天的玉米HiII杂交种幼胚，用预先活化的农杆菌浸染幼胚；

(3)吸去菌液，把幼胚转移到共培养基上；20℃共培养三天后转到恢复培养基上，28℃黑暗培养7天之后把有生长能力的幼胚转到第一次筛选培养基上，28℃黑暗培养2周，再转到第二次筛选培养基上，黑暗条件下培养2周；把生长良好的愈伤组织转到第一次分化培养基上进行分化，28℃黑暗分化3周，再转到第二次分化培养基上在24℃光照分化，得转基因玉米植株。

3.根据权利要求2所述的一种转基因玉米的培育方法，其特征在于，

步骤(1)中活化采用YEP培养基，配方：5g L^-1酵母提取物，10g L^-1蛋白胨，5g L^-1氯化钠，15g L^-1琼脂粉，pH 6.8，培养基冷到50℃后加抗生素；

步骤(2)中浸染采用的浸染液配方：N6培养基盐和维生素，1.5mg L^-1的2，4-D-二氯苯氧乙酸丁酯，0.7g L^-1L-脯氨酸,68.4g L^-1蔗糖,36g L^-1葡萄糖，pH 5.2，乙酰丁香酮100μmolL^-1；

步骤(3)中：共培养培养基配方：N6培养基盐和维生素，1.5mg L^-1 2,4-D-二氯苯氧乙酸丁酯，0.7g L^-1L-脯氨酸，30g L^-1蔗糖，3g L^-1植物凝胶，pH 5.8，0.85mg L^-1硝酸银，100μmolL^-1乙酰丁香酮，400mg L^-1半胱氨酸；

恢复培养基配方：N6培养基盐和维生素，1.5mg L^-1 2,4-D-二氯苯氧乙酸丁酯，0.7g L-1L-脯氨酸，30g L-1蔗糖，0.5g 2-(4-吗啉)-乙烷磺酸，3g L^-1植物凝胶，pH 5.8，0.85mg L^-1硝酸银，250mg L^-1噻孢霉素；

第一次筛选培养基配方：N6培养基盐和维生素，1.5mg L-1 2,4-二氯苯氧乙酸丁酯，0.7g L-1 L-脯氨酸，30g L-1蔗糖，0.5g 2-(4-吗啉)-乙烷磺酸，3g L^-1植物凝胶，pH 5.8，0.85mg L^-1硝酸银，250mg L^-1噻孢霉素，1.5mg L^-1双丙氨膦；

第二次筛选培养基配方：N6培养基盐和维生素，1.5mg L^-1 2,4-D二氯苯氧乙酸丁酯，0.7g L-1 L-脯氨酸，30g L-1蔗糖，0.5g 2-(4-吗啉)-乙烷磺酸，3g L^-1植物凝胶，pH 5.8，0.85mg L^-1硝酸银，250mg L^-1噻孢霉素，3.0mg L^-1双丙氨膦；

第一次分化培养基配方：MS盐和维生素，60g L^-1蔗糖，100mg L^-1肌醇，3g L^-1植物凝胶，pH 5.8，250mg L^-1噻孢霉素和3mg L^-1，双丙氨膦灭菌后加；

第二次分化培养基配方：MS盐和维生素，100mg L^-1肌醇，30g L^-1蔗糖，3g L^-1植物凝胶，pH 5.8。