[发明专利]同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的试剂盒及多重PCR检测方法

权利要求书

1.同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的试剂盒，其特征在于：包含广亲和基因S5的特异性引物和直立穗基因DEP1的特异性引物；

所述广亲和基因S5的特异性引物为：

S5-F：5′-GGCAATATGATATGACCAGCAC-3′，

S5-R：5′-ATGTAGCGAAGACAAAGGGAGT-3′；

所述直立穗基因DEP1的特异性引物为：

DEP1-F：5′-TTTCGGTGGATCGGGTAT-3′，

DEP1-R：5′-CGTGACACCGCTAATCGT-3′。

2.根据权利要求1所述的同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的试剂盒，其特征在于：还包含2×Es Taq MasterMix和DNA Marker。

3.同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的多重PCR方法，其特征在于：包括以下步骤：以水稻基因组DNA为模板，利用广亲和基因S5的特异性引物和直立穗基因DEP1的特异性引物进行多重PCR扩增，扩增产物经凝胶电泳分离后，根据特征条带判定结果；

所述广亲和基因S5的特异性引物为：

S5-F：5′-GGCAATATGATATGACCAGCAC-3′，

S5-R：5′-ATGTAGCGAAGACAAAGGGAGT-3′；

所述直立穗基因DEP1的特异性引物为：

DEP1-F：5′-TTTCGGTGGATCGGGTAT-3′，

DEP1-R：5′-CGTGACACCGCTAATCGT-3′。

4.根据权利要求3所述的同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的多重PCR方法，其特征在于：所述多重PCR扩增的反应体系为：2×Es Taq MasterMix 10μL，250~300ng/μL水稻基因组DNA 2μL，60ng/μL广亲和基因S5的特异性引物S5-F、S5-R各1μL，60ng/μL直立穗基因DEP1的特异性引物DEP1-F、DEP1-R各1μL，ddH₂O 4μL，总体积20μL。

5.根据权利要求4所述的同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的多重PCR方法，其特征在于：所述多重PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；然后94℃变性30s，56℃复性30s，72℃延伸90s，35个循环；最后72℃延伸8min，降至10℃保存。

6.根据权利要求5所述的同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的多重PCR方法，其特征在于：所述凝胶电泳的条件为：琼脂糖浓度1%，缓冲液1×TAE溶液，电压120V，电泳时间30min。

7.根据权利要求3或6所述的同步检测水稻广亲和基因S5和直立穗基因DEP1的多重PCR方法，其特征在于：所述根据特征条带判定结果的方法为：当扩增出321bp特征条带时，判定含有广亲和基因S5；当扩增出457bp特征条带时，判定不含广亲和基因S5；当扩增出1235bp特征条带时，判定含有直立穗基因DEP1；当扩增出1860bp特征条带时，判定不含直立穗基因DEP1。