[发明专利]一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物总量和组成的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物(主要包括酯)总量和组成的方法。

背景技术

栀子，学名Gardenia jasminoides Ellis，又名：黄果子、山黄枝、黄栀子、山栀子、水栀子、越桃、木丹、山黄栀、白蟾等，属茜草科植物。栀子的果实为传统中药材，是卫生部颁布的药食两用资源。栀子果实是秦汉以前应用最广的黄色染料。其中主要的色素为藏花酸衍生物，主要为一系列糖苷构成的酯类，含量最多的是藏花素(Crocin)。

栀子黄是中国(GB-2760)和日本两国均已批准合法使用的食品添加剂，属着色剂。其功能是给食品着色。

栀子黄是栀子果实的萃取物。其中主要的色素是一系列藏花酸(亦称西红花酸，Crocetin)衍生物(主要为酯)。藏花酸为化合物的中文习惯命名，Crocetin为化合物的英文习惯命名，8,8'-双阿朴胡萝卜素-8,8'-二酸为化合物的中文半系统命名，8,8'-Diapocarotene-8,8'-dioic acid为化合物的英文半系统命名。化合物分子式为C₂₀H₂₄O₄，分子量为328.402Da。由于藏花酸分子中存在7个共轭双键，在理论上它可存在多种几何异构体。在自然界中，全反式异构体的数量最多，最常见。全反式藏花酸分子的结构如下：

栀子黄由色素和非色素组分组成。其中的色素组分包含一系列藏花酸衍生物和少量非藏花酸衍生物组分，具有颜色。非色素组分不具颜色。在色素组分中，藏花酸衍生物占多数。在藏花酸衍生物中，藏花素(Crocin)占多数。藏花素是由两个龙胆二糖和藏花酸形成的酯化物。其熔点为186℃，结晶体为深橙色，在水溶液中显橘黄色。全反式藏花素分子的结构为：

中国和日本两国均已颁布了栀子黄产品的国家标准。这两份文件都描述了应用电子吸收光谱法(UV-VIS)测定产品吸光系数(以色价表示)的方法，但未涉及藏花酸衍生物含量的测定，只提出将藏花素作为产品的标志性成分来描述产品的着色功能。这种评价方法具有简便易行的优点，但不能全面反映产品的着色功能与色素间的量效关系，也不利于产品的安全性评估。

到目前为止，栀子黄中尚有部分藏花酸衍生物和非藏花酸衍生物组分的分子结构尚未被描述清楚。描述这些组分结构的努力仍在持续。在这种情况下，测定这些组分的浓度吸光系数(如)是可能的。已知这些未知组分的浓度吸光系数后，可以完成栀子黄样品中藏花酸衍生物组分总量和组成的测定。

发明内容

为了克服现有的标准中只对栀子黄色素着色功能定性描述的不足，实现对栀子黄色素着色物质的定量检测，全面反映产品的着色功能与色素间的量效关系，便于对产品的安全性进行评估，本发明提供一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物总量和组成的方法。所述方法可在部分藏花酸衍生物分子结构尚未明确的情况下使用，并具有简单、易行、重复性良好等优点。

为实现上述目标，本发明采用以下技术方案：

一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物总量和组成的方法，所述方法包括测定已知浓度的栀子黄样品水溶液的吸光值，推算总藏花酸衍生物吸光系数，按郎伯比尔定律计算样品中藏花酸衍生物总量；根据各藏花酸衍生物组分的色谱峰面积和吸光系数计算样品中各藏花酸衍生物组分的相对质量，根据栀子黄样品的藏花酸衍生物总量和各藏花酸衍生物组分的相对质量计算样品中各藏花酸衍生物组分的质量。

一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物总量和组成的方法，所述方法包括以下步骤：

1)测定栀子黄样品的吸光值。称取M克栀子黄样品，溶解并定容于V毫升水中，将溶液稀释N倍，在紫外-可见光(UV-VIS)分光光度计上测定稀释液在440nm波长下的吸光值A。

2)获得样品的色谱图。在高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)上获得样品的色谱图。色谱条件是：固定相为C18柱，参数为：250×4.6mm i.d.,5μm。流动相A为水-乙腈-乙酸，体积比为74.95:25:0.05。流动相B为乙腈。采取线性梯度洗脱方法：流动相B在20分钟内从0升至13.3％(V/V)，20-35分钟内B维持13.3％(V/V)，流速为0.8毫升/分，进样体积20微升，柱温为室温。检测波长为440nm。对各组分积分得到峰面积。