[发明专利]一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物总量和组成的方法

权利要求书

1.一种测定栀子黄产品中藏花酸衍生物总量和组成的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)测定栀子黄样品的吸光值：称取M克栀子黄样品，溶解并定容于V毫升水中，将溶液稀释N倍，在紫外-可见光(UV-VIS)分光光度计上测定稀释液在440nm波长下的吸光值A；

2)获得样品的色谱图；在高效液相色谱上获得样品的色谱图；色谱条件是：固定相为C18柱，参数为：250×4.6mm i.d.,5μm；流动相A为水-乙腈-乙酸，体积比为74.95:25:0.05；流动相B为乙腈；采取线性梯度洗脱方法：流动相B在20分钟内从0升至13.3％(V/V)，20-35分钟内B维持13.3％(V/V)，流速为0.8毫升/分，进样体积20微升，柱温为室温；检测波长为440nm；对各组分积分得到峰面积；

3)鉴定含有藏花酸结构的各组分；应用HPLC-MS-MS，鉴定色谱图上含有藏花酸结构的各组分；色谱条件：同步骤2)；质谱条件：喷雾电压：-4Kv，鞘气30arb，辅助气10arb，吹扫气0arb；毛细管温度350℃；负离子检测模式；数据依赖性扫描；CID碰撞能量35％；碎片质量检测范围m/z为150至2000；

4)记录各组分的分子离子峰m/z值；在一级质谱图上，鉴定各含藏花酸结构组分的分子离子峰，并记录各含藏花酸结构组分的分子离子峰m/z值；

5)计算各藏花酸衍生物组分的峰面积相对比例；按式(1)计算各藏花酸衍生物组分峰面积的相对比例：

$F_i^{\′}\[\%\]=\frac{F_i}{{\mathrm{\Σ}}_{i=1}^n{F}_i}\×100\%---\left(1\right)$

其中，F'_i是含藏花酸结构组分i峰面积的相对比例，F_i是组分i的峰面积，n是含藏花酸结构组分的数量；

6)计算各藏花酸衍生物组分的浓度吸光系数；根据已公布的藏花酸浓度吸光系数按式(2)计算各含藏花酸结构组分的浓度吸光系数：

$A_{1{\mathrm{cm}}_i}^{1\%}=A_{1{\mathrm{cm}}_c}^{1\%}\×\frac{{\mathrm{MW}}_c}{{\mathrm{MW}}_i}---\left(2\right)$

其中，是含藏花酸结构组分i的浓度吸光系数，定义为1％(W/W)的样品溶液在1cm光程的比色杯中在440nm波长下的吸光值；是已公布的藏花酸在440nm下的浓度吸光系数，在此采用的值为i是含藏花酸结构组分的编号；MW_c是藏花酸分子量[Da]；MW_i是含藏花酸结构组分i的分子量[Da]，在此，采用该组分分子离子峰的m/z值；

7)计算栀子黄产品中总藏花酸衍生物的浓度吸光系数；根据式(1)和式(2)的计算结果，按式(3)以加权求和法计算栀子黄中总藏花酸衍生物的浓度吸光系数：

$A_{1{\mathrm{cm}}_{Total}}^{1\%}={\mathrm{\Σ}}_{i=1}^n{F}_i^{\′}{A}_{1{\mathrm{cm}}_i}^{1\%}---\left(3\right)$

其中，是总藏花酸衍生物的浓度吸光系数，F'_i是含藏花酸结构组分i的峰面积的相对比例，是含藏花酸结构组分i的浓度吸光系数，定义为1％(W/W)的样品溶液在1cm光程的比色槽中在440nm下的吸光值，i是含藏花酸结构组分的编号，n是含藏花酸结构组分的数量；

8)计算总藏花酸衍生物在总色素中的相对含量；按式(4)计算总藏花酸衍生物在总色素中的相对含量：

$M_{Total}^{\′}=\frac{{\mathrm{\Σ}}_{i=1}^n{F}_i}{{\mathrm{\Σ}}_{j=1}^m{F}_j}---\left(4\right)$

其中，M'_Total是总藏花酸衍生物在总色素中的相对含量，F_i是含藏花酸结构组分i的峰面积，n是含藏花酸结构组分的峰的数量，F_j是在440nm下有吸收组分j的峰面积，m是在440nm下有吸收组分的数量；

9)计算栀子黄样品中总藏花酸衍生物含量；根据式(1)、式(3)和式(4)所得结果，按式(5)计算栀子黄样品中总藏花酸衍生物含量：

$M_{Total}\[g\]=\frac{{\mathrm{AM}}_{Total}^{\′}V\[mL\]N}{A_{1{\mathrm{cm}}_{Total}}^{1\%}\×100}---\left(5\right)$

其中，M_Total是栀子黄样品中总藏花酸衍生物含量；A是样品溶液的吸光值；是总藏花酸衍生物的浓度吸光系数；V是样品定容体积；N是溶液的稀释倍数；

10)计算栀子黄样品中总藏花酸衍生物的相对含量；按式(6)计算栀子黄样品中总藏花酸衍生物的相对含量：

$M_{Total}^{\′\′}\[\%\]=\frac{M_{Total}}{M}\×100\%---\left(6\right)$

其中，M”_Total是栀子黄样品中总藏花酸衍生物相对含量，M_Total是栀子黄样品中总藏花酸衍生物含量，M是栀子黄样品的质量；

11)计算各藏花酸衍生物的相对质量；按式(7)，根据HPLC色谱图上各组分峰面积计算栀子黄样品中各藏花酸衍生物的相对质量；

$M_i^{\′}\[\%\]=\frac{\frac{F_i}{A_{1{\mathrm{cm}}_i}^{1\%}}}{{\mathrm{\Σ}}_{i=1}^n\frac{F_i}{A_{1{\mathrm{cm}}_i}^{1\%}}}\×100\%---\left(7\right)$

其中，M'_i[％]是含藏花酸结构组分i的相对质量，是含藏花酸结构组分i的浓度吸光系数，F_i是含藏花酸结构组分i的峰的面积，n是含藏花酸结构组分的数量；

12)计算栀子黄样品中各藏花酸衍生物的质量；按式(8)计算栀子黄样品中各藏花酸衍生物的质量；

M_i[g]＝M_i′M_Total(8)

其中，M_i是含藏花酸结构组分i的质量，M'_i是含藏花酸结构组分i的相对质量，i是含藏花酸结构组分的编号，M_Total是栀子黄样品中总藏花酸衍生物含量。