[发明专利]9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷在制备降糖药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及小檗红碱II相代谢产物9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷(BRBG)降糖活性 和潜在应用价值，有望通过进一步研究成为一类创新药物，还涉及生物样本中该化合物的分 离、纯化和制备。

背景技术

小檗碱是从传统中药黄连中分离的一种具有多重药理作用的生物碱。作为其主要的代谢 产物之一，小檗红碱(即9-去甲基小檗碱)近些年来被发现具有多重药理活性，前期研究发 现具有比小檗碱更强的体内降血糖作用。本发明中的BRBG为小檗红碱9-O-位葡萄糖醛酸取 代产物，是小檗红碱体内最主要的代谢产物，与小檗红碱体内发挥药效密切相关。研究发现 其可以促进肝脏细胞葡萄糖的消耗和利用，促进葡萄糖类似物的摄取，促进糖原合成。但到 目前为止，国内外尚未见有关小檗红碱葡萄糖醛酸苷药理活性的研究报告。

发明内容

本发明所用的BRBG采用常规的分离纯化方法从生物样本中制得。本实验室采用 LC-MS-PDA检测分析，其纯度达95％，经质谱(MS)法和核磁共振(¹H-NMR)法分析鉴 定，本研究所用的BRBG产品化学结构正确，即9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷纯度和化学 结构符合展开生物学活性和药理作用的研究要求。

发明人通过对小檗红碱体内代谢产物进行研究，发现小檗红碱体内主要代谢产物之一 BRBG具有良好的降糖作用，有望经过进一步研究用于临床降血糖和糖尿病治疗。

本发明的有益效果

本发明提供了小檗红碱体内活性代谢产物9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷具有良好的降 糖药效证据，为制备新型降糖药物提供更好的选择。

附图说明

图1为IT-TOF测定的MS1和MS2特征离子碎片。

图2为BRBG促进L-O2肝细胞葡萄糖消耗。其中，Blank为空白对照组；BBR为阳性对照 组(小檗碱50μM)，BRB和BRBG分别为小檗红碱和9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷给药 组(浓度分别为5，20，50μM)。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001vs空白对照组。

图3为BRBG促进L-O2肝细胞摄取荧光标记葡萄糖类似物(2-NBDG)。Control为未给药 的空白对照组，BRB和BRBG分别为小檗红碱和9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷给药组(浓 度为50μM)。

图4为9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷促进肝细胞糖原生成。其中，Blank为空白对照组； BBR为阳性对照组(小檗碱50μM)，BRB和BRBG分别为小檗红碱和9-O-β-D-小檗红碱葡 萄糖醛酸苷给药组(50μM)。**P＜0.01，***P＜0.001vs空白对照组。

具体实施方式

本发明通过下面的实施例进行详细的解释，但并不意味着本发明仅限于此。

实施例1.9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷分离制备和结构鉴定。

方法：取小檗红碱灌胃给药后的生物样品(尿液、胆汁等)，沉淀蛋白并过滤，旋蒸浓缩，液 相制备柱分离纯化。目标产物冻干处理后，LC-MS-PDA分析纯度，IT-TOF分析碎片特征， DMSO-d6溶解¹HNMR500MHz核磁共振波谱仪测定结构。

结果：其IT-TOF碎片特征如图1，MS1[M+H]⁺m/z498.1379，推测结构为[C25H24NO10]⁺， MS2[M+H]⁺m/z322.1070，推测结构为[C19H16NO4]⁺。

其核磁共振氢谱结果如下：

¹H-NMR，7.75(1H，s，H_1)，7.08(1H，s，H_4)，3.20(2H，o，H_5)，5.02-5.05(1H，m，H_6)，4.87-4.91(1H，m，H _6)，10.09(1H，s，H_8)，8.16-8.18(1H，d，8.55Hz，H_11)，8.00-8.02(1H，d，9.10Hz，H_12)，8.87(1H，s，H_13) ，6.17(2H，s，2，3-OCH2O)，4.03(3H，s，10-OCH3)，4.89-4.91(1H，d，7.55Hz，GlcUA-1).