[发明专利]一种从紫草中分离制备具有神经氨酸酶抑制活性的化合物的方法

权利要求书

1.一种从紫草中分离制备具有神经氨酸酶抑制活性的化合物的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）以石油醚作为提取溶剂，制备得到紫草提取液；所述紫草提取液的制备方法为：将紫草与石油醚按料液比为1:80-1:120混合，超声提取20-40min后，蒸干滤液，用乙醇和MES缓冲液复溶后过膜待用，作为紫草提取液；

（2）将紫草提取液与神经氨酸酶混匀，紫草提取液和神经氨酸酶加入的体积比为1:4-1:6，孵育，孵育后超滤离心，离心后加入甲醇使酶变性，释放出结合的化合物，HPLC检测；以变性神经氨酸酶作为对照，通过对比HPLC图谱筛选出具有神经氨酸酶抑制活性的化合物；

（3）利用半制备色谱制备筛选出的具有神经氨酸酶抑制活性的化合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，紫草与石油醚按料液比为1:100混合。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，紫草提取液和神经氨酸酶加入的体积比为1:5。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，孵育的条件为：37℃恒温孵育30 min。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述超滤离心的操作为：将紫草提取液和神经氨酸酶反应后的溶液移至超滤离心管中，所述超滤离心管的截留分子量为100KD，7000-9000r/min离心5-10min，再用MES缓冲液离心冲洗，以除去未结合的小分子。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述半制备色谱的制备条件为：紫草提取液的进样量为400-600μL，乙腈-水=80:20作为洗脱流动相，流速为5-7 mL/min，检测波长为280 nm。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，半制备色谱的色谱柱为Shim-pack Prep-ODS(H)KIT色谱柱。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法分离制备的具有神经氨酸酶抑制活性的化合物分别为阿卡宁、乙酰阿卡宁、异丁酰阿卡宁、β, β -二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰阿卡宁。