[发明专利]一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法

权利要求书

1.一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法，其特征在于：以海地瓜为原料，通过温和的二阶段酶解处理方法，利用超滤膜分离技术分别得到海地瓜多肽混合液和海地瓜多糖混合液，再通过选用截留分子量不同的超滤膜，实现对海地瓜多肽和海地瓜多糖的分级分离，最终得到3种分子量的海地瓜蛋白多肽产品和4种分子量的海地瓜多糖产品，具体包括如下：

（1）预处理：海地瓜干品用30-50℃清水泡发24-36小时，洗净体表与体内的泥沙、淤泥，切碎成块状，置于40-50℃烘箱中烘至恒重，粉碎至60-100目颗粒，制成海地瓜干粉，密封干燥保存备用；

（2）酶解：海地瓜干粉加入纯净水，料液质量比为1：30-1：80；采用不同的酶和水解条件进行二阶段酶解：用碱调pH至6.8-8.5，加入复合蛋白酶Ⅰ，温度40-60℃，保温振荡水浴酶解1-4小时；用酸调整pH至4.0-7.0，加入复合蛋白酶Ⅱ，温度40-60℃，保温振荡水浴酶解2-5小时；酶解结束后加热灭酶，抽滤除杂，得酶解液待用；

（3）超滤膜分离：将步骤(2)中获得的海地瓜酶解液在超滤条件下，选用截留分子量为10KDa超滤膜进行超滤分离，透过液为海地瓜多肽混合液，截流液为海地瓜多糖混合液；

（4）海地瓜多肽的分级分离：在超滤条件下，选用截留分子量为5 KDa和1 KDa的超滤膜，依次对步骤(3)中获得的分子量在10 KDa以下的海地瓜多肽混合液进行超滤分级分离，采用截留液全循环超滤方式，当截留液体积为原始酶解液体积的1/5时，达到超滤终点；依次收集5 KDa截留液、1 KDa截留液和1 KDa透过液，透析除盐，旋转蒸发后，冷冻干燥得到3个海地瓜多肽产品P₁、P₂、P₃；

（5）海地瓜多糖的分级分离：在超滤条件下，选用截留分子量为10 KDa、100 KDa和200KDa的超滤膜对海地瓜多糖混合液进行截留液全循环超滤，当截留液体积为原始酶解液体积的1/5时，达到超滤终点；依次收集10 KDa透过液、100 KDa透过液、200 KDa透过液和200KDa截留液，透析除盐，旋转蒸发后，冷冻干燥得到4个海地瓜多糖产品G₁、G₂、G₃和G₄。

2.根据权利要求1所述的一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法，其特征在于：在步骤（2）中，所用的复合蛋白酶Ⅰ为：胰蛋白酶和碱性蛋白酶，两者的重量比为2：1，复合蛋白酶Ⅰ的添加量为原料重量的0.2-3%；所用的复合蛋白酶Ⅱ为：木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶，三者的重量比为3：1：1，复合蛋白酶Ⅱ的添加量为原料重量的0.5-4%。

3.根据权利要求1所述的一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法，其特征在于：在步骤(3)、步骤(4)、步骤(5)中，所述的超滤条件：操作压力为0.05-1.0 MPa，操作温度为25-45℃。

4.根据权利要求1所述的一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法，其特征在于：在步骤(4)、步骤(5)中，所述的旋转蒸发温度为40-60℃。

5.根据权利要求1所述的一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法，其特征在于：所述海地瓜多肽产品P₁、P₂、P₃，其分子质量范围分别是5~10 KDa、1~5 KDa和＜1 KDa；所占比例12.46%、P₂为39.07%、P₃为48.47%。

6.根据权利要求1所述的一种海参多糖和海参胶原蛋白多肽的联合制备方法，其特征在于：所述海地瓜多糖产品G₁、G₂、G₃和G₄，其分子质量范围分别是＜10 KDa、10~100 KDa、100~200 KDa和＞200 KDa，所占比例：G₁为3.67%、G₂为19.36%、G₃53.09%、G₄为23.88%。