[发明专利]一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法

说明书

本发明公开了一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法。浒苔干燥后超微粉碎，利用乙醇回流提取工艺，得到干燥脱脂的浒苔粉末，经微波辅助提取、脱蛋白及去除多糖和色素后获得浒苔寡糖，再将唾液酸转移酶加入到含有浒苔寡糖的反应体系中，进行糖基化反应，制备得到所述的唾液酸化浒苔寡糖，该寡糖能显著提高肠道益生菌数量，可用于制备改善肠道菌群的药品或保健品。

技术领域

本发明属于保健品技术领域，具体涉及一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖及其制备方法。

背景技术

人类肠道中存在巨量不同类型的细菌，肠道内菌群的稳定对于保持人类机体健康是必不可少的。益生菌是通过改善肠道微生物平衡从而对宿主施加有益影响的作用，包括抑制病原菌的生长，繁殖改善肠道菌群结构，增强机体免疫功能，以及降低胆固醇和改善血脂等。大多数益生菌来自双歧杆菌属和乳杆菌属，益生菌数量的减少可引起整个肠道菌群失调和肠道微生态失衡，从而导致许多代谢性疾病的发生。

唾液酸化寡糖能促进益生菌在肠道上皮定殖、增殖，具有显著抑制病原菌黏附、维持婴儿肠道菌群平衡、参加机体免疫等功能。唾液酸化寡糖的合成以核苷糖为糖基供体，乳糖或乙酰乳糖为受体，在唾液酸转移酶的催化条件下完成。唾液酸糖基转移酶以胞苷一磷酸-â-N-乙酰神经氨酸为底物将唾液酸残基转移至新的糖基受体上形成唾液酸糖苷化合物。浒苔是重要的经济海藻，在降低胆固醇、降血糖、提高人体免疫力以及抗衰老等方面都有潜在的应用价值。目前，在唾液酸化浒苔寡糖与促进肠道益生菌的研究方面未见到相关专利和报道，本发明制备的唾液酸化浒苔寡糖对肠道益生菌增殖有明显促进作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法。工艺路线简单，是一种制备功能性寡糖的有效方法，极大提升了绿藻浒苔资源的经济附加值。经验证，该唾液酸化浒苔寡糖对肠道益生菌嗜酸乳杆菌和双歧杆菌增殖有明显增殖作用。本发明糖基化浒苔寡糖可应用于益生菌制剂药物或保健品的制备，所要解决的技术问题是提供一种效果好且利用度高的改善肠道菌群的寡糖。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

（1）将浒苔干燥后超微粉碎过80-100目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入60-80%乙醇回流提取1-2 h，干粉重量与乙醇体积比（g/mL）为1:20-30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；

（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量与蒸馏水体积比（g/mL）为1:20-25，60-70℃萃取温度下450-600 W微波辅助提取2-3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的3-8%，真空冷冻干燥后粉碎；

（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量与蒸馏水体积比为（g/mL）1:10-20，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次；

（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比（g/mL）1:30-50去除色素，将活性炭与洗脱液于摇床中60-80 r/min振荡1-2h，6000-8000rpm离心20-30 min，收集上清液；

（5）将步骤（4）得到的上清液旋蒸浓缩至原体积的3-8%，按体积比1:3-4加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入4-10℃条件下静置24 h，6000-8000rpm离心20-30 min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；