[发明专利]一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖及其制备方法

说明书

本发明公开了一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法。该工艺流程特征在于利用微波辅助提取浒苔硫酸多糖，经脱脂及除蛋白和色素后，依次添加多聚半乳糖醛酸酶、á‑L‑鼠李糖苷酶和木聚糖酶进行酶解，灭酶活后，采用乙醇去除酶和未降解多糖，离心上清液过分子筛，截留物冷冻干燥后得到浒苔活性寡糖。经动物药效学证实，浒苔寡糖能够显著降低高血糖模型小鼠血糖值。本发明采用非特异性商业化酶，工艺路线简单，高效且环境友好，既提高了寡糖的制备量，同时又降低了酶的消耗和生产成本，是一种制备浒苔活性寡糖的有效方法。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体关于一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法。

背景技术

糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷及（或）其生物学作用障碍引起的以高血糖为特征的全身代谢紊乱性疾病，其发病率逐年增加。浒苔多糖属于绿藻多糖，多为水溶性的硫酸多糖，主要是葡萄糖醛酸-木糖-鼠李糖聚合物具有降低胆固醇、降血糖和调节血脂等方面的作用。与多糖相比，寡糖具有易溶于水、无抗原性，以及在宿主体内具有较弱的积累效应等优点。目前研究主要集中在浒苔多糖方面，尚未见浒苔寡糖降血糖及其制成辅助治疗2型糖尿病保健品的报道。

寡糖在规模化应用上受到很大的限制，主要原因是对寡糖制备技术的研究尚不够深入。寡糖的酶法制备是利用特定的酶对多糖进行降解的方法，其反应条件温和，无其他副反应，产品均一性好。微波具有强大的穿透能力，细胞经微波处理会吸收能量，细胞内部的高温高压会使多糖内部糖苷键断裂，引起分子聚合度的改变，从而提高了糖类的产量。微波辅助分步酶解法制备浒苔寡糖，具有操作方便、提取时间短、效率高、无污染的优点。在目前所公开的海藻寡糖相关专利中，CN101891904B公开了海带寡糖在制备防治植物病害药物方面的应用；CN102827899B公开了一种龙须菜琼胶寡糖及其制备方法与其在制备抗氧化、抗紫外线保健品和化妆品中的应用；CN100508985C公开了一种低分子量褐藻胶寡糖，虽然提到了其在糖尿病防治方面的应用，但该专利所述低分子量褐藻胶寡糖，是利用酸水解海藻酸钠所得。本发明中所述浒苔寡糖为利用分步酶解的绿色制备方法制得，具有不会发生副反应、条件温和、环境友好等优点。本发明中通过微波辅助分步酶解制备绿藻浒苔寡糖及其降血糖活性均未见其它研究报道或专利。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法。制备工艺路线简单合理，降低了酶的消耗和生产成本，提高了制备产量，是一种绿色高效制备浒苔活性寡糖的有效方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

（1）将浒苔干燥后粉碎，向浒苔干粉中加入60-80%乙醇回流提取1-2小时，干粉重量与乙醇体积比（g/mL）为1:20-30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干得到干燥脱脂的浒苔粉末；

（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量与蒸馏水体积比（g/mL）为1:25-30，60-70℃萃取温度下480-600 W微波辅助提取2-3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，加入3-4倍体积95%乙醇，4-10℃静置沉淀8-12小时后，离心收集沉淀，真空冷冻干燥后粉碎，得粗浒苔硫酸多糖；

（3）向步骤（2）所得粗浒苔硫酸多糖中加入蒸馏水，其中硫酸多糖粉末质量与蒸馏水体积比为1:10-20，进行搅拌复溶。用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次；

（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭去除色素，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比（g/mL）1:30-50,于摇床中60-80 r/min振荡1-2h，6000-8000rpm离心20-30 min，收集上清液；