[发明专利]一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖及其制备方法

权利要求书

1.一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下：

（1）将浒苔干燥后粉碎，向浒苔干粉中加入60-80%乙醇回流提取1-2小时，干粉重量g与乙醇体积mL比为1:20-30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干得到干燥脱脂的浒苔粉末；

（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量g与蒸馏水mL体积比为1:25-30，60-70℃萃取温度下480-600 W微波辅助提取2-3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，加入3-4倍体积95%乙醇，4-10℃静置沉淀8-12小时后，离心收集沉淀，真空冷冻干燥后粉碎，得粗浒苔硫酸多糖；

（3）向步骤（2）所得粗浒苔硫酸多糖中加入蒸馏水，其中硫酸多糖粉末质量mg与蒸馏水mL体积比为1:0.5-1.5，进行搅拌复溶；用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次；

（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液经过非极性吸附剂活性炭去除色素，活性炭使用量g与洗脱液mL按重量体积比1:30-50，于摇床中60-80r/min下振荡1-2h，6000-8000rpm离心20-30 min，收集上清液；

（5）利用截留分子量8000-14000透析袋，去除小分子及色素；截留液在50-60℃及转速为40-60 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥粉碎后，得到精浒苔硫酸多糖粉末；

（6）将步骤（5）中所得精浒苔硫酸多糖粉末用蒸馏水溶解，质量体积比1:10-25，调节pH为6.5-8.0，加入多聚半乳糖醛酸酶后置于32-40℃，速度为65-90 r/min水浴摇床中酶解0.5-1.5 h后取出，沸水加热5-10 min以灭酶活，冷却至室温，离心取上清液备用；

（7）将步骤（6）离心所得上清液调节pH为5.0-6.5，加入α-L-鼠李糖苷酶后置于35-50℃，速度为65-90 r/min水浴摇床中酶解1-1.2 h后取出，沸水加热5-10 min以灭酶活，冷却至室温，离心取上清液备用；

（8）将步骤（7）离心所得上清液调节pH为4.5-6.0，加入木聚糖酶后置于50-60℃，速度为65-90 r/min水浴摇床中酶解0.5-1 h后取出，沸水加热10-15 min以灭酶活，冷却至室温，离心取上清液备用，至室温，离心取上清液备用；

（9）向步骤（8）中酶解后离心所得上清液加入等体积比95%乙醇，4-10℃静置沉淀1.5-2.5 h后，沉降除去反应液中蛋白，离心收集上清备用；

（10）向步骤（9）中酶解后离心所得上清液加入体积比1:2-3的95%乙醇沉降除去反应液中未降解多糖，4-10℃静置沉淀8-10 h后，离心收集上清，在37-40℃及转速为60-80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/5-1/4，即为浒苔寡糖粗品溶液；

（11）将步骤（10）中浒苔寡糖粗品溶液，采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液；

（12）将步骤（11）中透析液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到浒苔活性寡糖。

2.根据权利要求1所述的一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖制备方法，其特征在于：所述多聚半乳糖醛酸酶、α-L-鼠李糖苷酶、木聚糖酶与步骤（6）中精浒苔硫酸多糖粉末的质量比分别为1:10-15、1:15-25、1:20-40。