[发明专利]草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因及其制备方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及鉴定18个草木樨属物种的DNA条形码基因及其分类标准序列。具体涉及草木樨属18个物种植物条形码的开发和应用。

背景技术

草木樨为豆科一年或两年生的草本异花授粉植物，其在全世界共有19种(Stevenson,1969)。草木樨属在花的结构,颜色，种子，叶片以及果荚形态上差异很大(Klebesadel,1954；Moussavi,2001)，很难根据其形态特征和生活习性进行分类，并且在生产流通中的品种混杂程度较高，不利于种质资源区分及入库分类保存。目前，对于草木樨属不同物种的分类鉴定除了基本的形态研究外，没有更好的分类标准。因此，准确快速的鉴定并区分草木樨属物种对其生产实践具有重要意义。

目前，运用DNA条形码技术对植物的分类鉴定已有报道，并已形成了相关规范，但该技术运用到草木樨的分类鉴定将面临一些困难，草木樨属物种为异花授粉植物，不同种之间杂交，遗传差异小，单个条形码基因很难清晰鉴别不同种，标准的条形码序列很难确定等。

本发明采用DNA条形码技术，使用保守性好、特异性高的5个条形码基因，根据草木樨条形码基因扩增的碱基序列不同进行鉴定。该鉴定方法具有高效、快速、准确等特点，尤其是遗传差异较小的品种及一些种名混乱的地方品种，该方法具有更突出的区分能力。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因。

本发明的目的二是提供一种草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因制备方法。

本发明的目的三是提供草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因标准分类条形码序列。

以便高效、快速、准确的鉴定不同种草木樨。此方法操作简便，省时高效，可对未知草木樨样本进行快速鉴定，相比传统的通过观察草木樨花、叶片、果荚等形态鉴定法，可大大提高效率。该方法能在实验室条件下较短时间内很好的完成，具有很好的推广价值，有助于种子检验人员快速有效的区分不同草木樨种质资源，有利于储存库草木樨种子准确的分类保存。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因，其主要特点在于包括有：

草木樨属植物物种鉴定，基于ITS基因的特异引物对，正向基因(5′-3′)：GGAAGKARAAGTCGTAACAAGG；反向基因(5′-3′)：RGTTTCTTTTCCTCCGCTTA；

或草木樨属植物物种鉴定，基于psbA-trnH基因的特异引物对，正向基因(5′-3′)：GTTATGCATGAACGTAATGCTC；反向基因(5′-3′)：CGCGCATGGTGGATTCACAAATC；

或草木樨属植物物种鉴定，基于rbcL基因的特异引物对，正向基因(5′-3′)；AGACCTWTTTGAAGAAGGTTCWGT；反向基因(5′-3′)：TCGGTYAGAGCRGGCATRTGCCA；

或草木樨属植物物种鉴定，基于matK基因的特异引物对，正向基因(5′-3′)；CCCRTYCATCTGGAAATCTTGGTTC；反向基因(5′-3′)：GCTRTRATAATGAGAAAGATTCTGC；

或草木樨属植物物种鉴定，基于trnL基因的特异引物对，正向基因(5′-3′)；CGAAATCGGTAGACGCTACG；反向基因(5′-3′)：ATTTGAACTGGTGACACGAG。

所述的草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因制备方法，其主要特点在于包括有以下步骤：

A.通过草木樨的不同生物学特性初步鉴定18个种；

B.幼苗DNA的提取；

C.目标DNA条形码基因的筛选；

D.目标DNA条形码基因片段的扩增与测序；

E.测序结果的核查；

F.序列比对、编辑、质量核查、目标DNA条形码序列建树；

G.标准分类DNA条形码基因及对应序列的确认；

H.标准分类DNA条形码基因及对应序列准确性验证。