[发明专利]结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201610096261.7 | 申请日： | 2016-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN105601753A | 公开（公告）日： | 2016-05-25 |
| 发明（设计）人： | 付玉荣;伊正君 | 申请（专利权）人： | 潍坊医学院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/16;A61P31/06 |
| 代理公司： | 潍坊正信专利事务所 37216 | 代理人： | 石誉虎 |
| 地址： | 261053 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 结核杆菌 噬菌体 双组份 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白，其特征在于：该融合溶菌蛋白具有噬菌体双 组份溶菌蛋白的氨基酸序列，是由两段编码噬菌体溶菌蛋白的基因序列在噬菌体溶菌蛋白 1和溶菌蛋白2的引物作用下经过扩增、连接、构建载体、转化、表达、纯化后制得。
2.如权利要求1所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白，其特征在于：所述噬菌体 溶菌蛋白1引物为包含以下序列的引物：
溶菌蛋白1LB上游：
5’-CATCCATGGGCAAGCTTATGAGCCCCAAGATCCG-3’
溶菌蛋白1LB下游：
5’-GTAGCGGCCGCTCTAGATCATCGGTTCCAGGGCT-3’
所述噬菌体溶菌蛋白2引物为包含以下序列的引物：
溶菌蛋白2HN上游：
5’-CTACCATGGGCAAGCTTATGAGCAAGCCCTGGCT-3’
溶菌蛋白2HN下游：
5’-GAAGCGGCCGCTCTAGATCAGATCTGTCGTAGGAACTCG-3’。
3.如权利要求2所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白，其特征在于：所述噬菌体 溶菌蛋白1和溶菌蛋白2的引物为：
溶菌蛋白1LB上游：
5’-CATCCATGGGCAAGCTTATGAGCCCCAAGATCCG-3’
溶菌蛋白1LB下游：
5’-GTAGCGGCCGCTCTAGATCATCGGTTCCAGGGCT-3’
溶菌蛋白2HN上游：
5’-CTACCATGGGCAAGCTTATGAGCAAGCCCTGGCT-3’
溶菌蛋白2HN下游：
5’-GAAGCGGCCGCTCTAGATCAGATCTGTCGTAGGAACTCG-3’。
4.如权利要求1所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白的制备方法，其特征在于： a设计如权利要求3所述引物对噬菌体溶菌蛋白1和溶菌蛋白2进行PCR扩增；
b用重组PCR方法，使用linker将两段序列连接获得连接基因；
c将连接基因连接入原核表达质粒构建成重组质粒；
d将重组质粒转化到原核表达载体进行表达；
e纯化表达出的蛋白，得到目的蛋白。
5.如权利要求4所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白的制备方法，其特征在于： 所述的噬菌体为D29噬菌体。
6.如权利要求5所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白的制备方法，其特征在于： 所述的原核表达质粒为pET32a。
7.如权利要求6所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白的制备方法，其特征在于： 所述的原核表达载体为E.coliBL21。
8.如权利要求1所述的结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白在制备治疗结核分枝杆菌 感染的药物中的用途。
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