[发明专利]一种融合蛋白及其应用

说明书

本发明提供了一种融合蛋白，该融合蛋白包括与猪流行性腹泻病毒抗原性蛋白连接的单体铁蛋白亚基蛋白，该猪流行性腹泻病毒抗原性蛋白包含猪流行性腹泻病毒S蛋白和/或其片段，还可进一步包括S1蛋白、M蛋白、N蛋白和/或其片段。本发明还提供了含所述融合蛋白的纳米颗粒。本发明还提供了含该纳米颗粒和/或载体的疫苗组合物。本发明还公开了该疫苗组合物的制备方法及其在制备预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。该纳米颗粒制备的疫苗组合物，避免了用猪流行性腹泻病毒全病毒制备传统灭活疫苗过程中全病毒难以分离、培养的技术难题；该纳米颗粒可利用基因工程技术进行大量重组表达，不仅耗时短，还可便于大规模生产。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒的融合蛋白、含该融合蛋白的纳米颗粒、含该纳米颗粒的疫苗组合物及其制备与应用。

背景技术

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhoea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起猪腹泻的一种重要急性、接触性、病毒性肠道传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为特征。该病可发生于任何年龄的猪，年龄越小，症状越重，死亡率越高，特别地，7日龄内新生仔猪发生腹泻后3-4天，呈现严重脱水而死亡，死亡率高达50%，最高的死亡率达100%。该病最早于上世纪70年代发生在英国和比利时，1973年先后在我国上海、辽宁、吉林等地分离到PEDV。PEDV可在猪群中持续存在，各种年龄段的猪均易感。哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100%，尤以哺乳仔猪严重，病死率达100%。目前，还没有特效药物可抵抗PEDV，由于该病发病急，流行快，猪群一旦感染，就会给养殖户带来巨大的经济损失。

中国于1980年首次分离到PEDV，以后许多地区相继报道有本病发生，并主要在冬春季节散发，造成的危害巨大。自2010年至今，在我国华南、华北部分省份暴发了严重的传染性腹泻疾病，已超过100万只的猪死亡（Sun RQ, Cai RJ, Chen YQ, et al. Outbreakof porcine epidemic diarrhea in suckling piglets, China. Emerging infectiousdiseases, 2012, 18(1): 161-162）。该疾病发病突然，传播较快，流行范围广，流行时间长，应用各种抗生素防治均无效，其发病率与死亡率很高，造成重大的经济损失，经研究表明：该疾病的罪魁祸首便是猪流行性腹泻病毒变异株（Chen JF, Liu XZ, Shi D, et al.Complete Genome Sequence of a Porcine Epidemic Diarrhea Virus Variant.Journal of Virology, 2012, 86: 3408）。

目前，对于该疾病的防控主要采取传统工艺以制备灭活疫苗免疫接种，但PEDV全病毒难以分离、培养。因此，如何解决防控PEDV变异株所带来的疾病的问题是猪流行性腹泻这一领域亟需解决的技术问题。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明人经过反复试验，制备了一种融合蛋白，含该融合蛋白的纳米颗粒，以及含该纳米颗粒的疫苗组合物与应用。该疫苗组合物可有效预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒所导致的疾病。

本发明涉及一种融合蛋白，所述融合蛋白包括与猪流行性腹泻病毒抗原性蛋白连接的单体铁蛋白亚基蛋白；其中，所述猪流行性腹泻病毒抗原性蛋白包括猪流行性腹泻病毒S蛋白和/或其片段，还可进一步包括S1蛋白、M蛋白、N蛋白和/或其片段；其中，所述单体铁蛋白亚基蛋白包括细菌铁蛋白、植物铁蛋白、藻铁蛋白、昆虫铁蛋白、真菌铁蛋白和哺乳动物铁蛋白；其中，所述单体铁蛋白亚基蛋白为幽门螺杆菌铁蛋白；其中，所述单体铁蛋白亚基蛋白为优化的幽门螺杆菌铁蛋白；其中，所述优化的幽门螺杆菌铁蛋白核苷酸序列编码SEQ ID NO.2氨基酸序列。