[发明专利]一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法。癌胚抗原检测试剂盒，包括：第一适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段的3’端通过羟基结合一个生物素构成；第二适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段构成；链霉亲和素包被的磁珠；KCl溶液、氯化血红素溶液、反应缓冲液、显色液、终止反应液。本发明所述试剂盒对癌胚抗原进行检测，较现有检测方法，无需动物免疫抗体和酶标记过程，核酸适体为化学方法合成，稳定性和环境耐受性更好，且试剂保存更为方便，定量检测仅需要一台可见分光光度计即可。

技术领域

本发明涉及一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种磁珠分离技术联合核酸适体特异性捕集和自催化作用比色检测癌胚抗原的试剂盒，属于肿瘤标志物检测技术领域。

背景技术

癌症是当今医学领域的顽症之一，其严重威胁人类的身体健康，随着人类生存环境的恶化，这种威胁呈上升趋势。据世界卫生组织统计，早期癌症的治愈率可达80％，但大多数恶性肿瘤在疾病早期缺乏特异性的临床表现，且临床上传统的诊断方法如影像学、细胞学检查等方法灵敏度不够高，再者在医疗资源匮乏的地区精密诊断仪器尚难以普及，故大多数癌症患者确诊时已为中晚期，只有约10％的病人具有手术切除的条件，难以挽救更多人的生命。因此，恶性肿瘤的早期发现，早期诊断和治疗仍是迄今为止治疗恶性肿瘤最为有效的手段之一，而癌症的早期诊断最新、最有效的方法是通过血液检查，寻找肿瘤标志物。

肿瘤标志物是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的反应肿瘤存在或者生长的一类物质，包括胚胎抗原类、糖链抗原类、激素、酶、蛋白质类及基因类标志物等，这一类物质通常不存在于正常成人组织而见于胚胎组织，或者肿瘤组织中的含量超过正常组织的含量。在临床检验工作中，肿瘤标志物的血清学检测标本易获得，方法简单快捷，无创，已经广泛用于肿瘤的诊断，判断癌症的分期评价治疗的方案和判断预后。

癌胚抗原(CEA)是大肠癌组织产生的一种糖蛋白，能反映人体的多种肿瘤的存在，是一类广谱性肿瘤标志物，正常人血清中癌胚抗原的含量极低，癌胚抗原升高主要见于结肠癌，其对于胰腺癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等恶性肿瘤诊断也具有重要价值。目前检测血清中CEA含量主要采用免疫学方法，如放射免疫分析法、化学发光免疫分析法、酶免疫分析法等，均依据癌胚抗原与其抗体的免疫反应。而优质抗体需由免疫动物获得，费时，成本较高，且易受动物机体状态及抗体纯化技术的影响，不同批次的抗体在特异性和性能方面常存在较大的差异而影响检验结果的准确性。再者，化学发光免疫分析法灵敏度高但仪器昂贵，放射免疫分析还存在同位素危害，不利于基层医疗机构的普及使用。目前酶免疫分析法试剂盒应用较为广泛，此类方法结果判读依据酶催化底物显色，需要先将抗原或抗体与酶结合制备酶标试剂。酶标记过程繁复，且酶活性易受温度等因素的影响，呈溶液状态的酶标试剂的保质期会严重缩短，故抗体质量、酶标记技术及低温保存条件成为影响酶免疫分析法试剂盒准确性的重要因素。

核酸适体是一段由碱基组成的单链寡核苷酸片段，通过筛选得到的适体不仅具有类似抗体对目标分子高特异性，结构简单、易合成，反应速度快等优点，而且人工合成的核酸适体不依赖于动物免疫，相对抗体而言，适体的稳定性和环境耐受性更好，检验的成本更低。目前，就适体在血样肿瘤标志物的检测分析中的应用已取得了重要的进展，主要集中在电化学分析法，荧光分析法，电化学发光分析法等，表面增强罗曼散射法，表面增强等离子共振法等，方法在灵敏度、选择性等方面都有很大改进，但仍对检测仪器，实验技术有较高的要求。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法。

本发明技术方案如下：

一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒，包括：

第一适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段的3’端通过羟基结合一个生物素构成；