[发明专利]一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒，包括：

第一适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段的3’端通过羟基结合一个生物素构成；

第二适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段构成；

链霉亲和素包被的磁珠；

0.2～1.0 mol/L 的KCl溶液，体积为 5～30 μL；

5～10 μmol/L的氯化血红素溶液，体积为1～5 μL；

反应缓冲液、显色液、终止反应液。

2.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第一适体的反应浓度为1～5 μmol/L，体积为5～30 μL。

3.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第二适体的反应浓度为1～5 μmol/L，体积为5～30 μL。

4.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的磁珠浓度为2～10 mg/mL，用量为2～10 μg。

5.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液为pH7.2～7.4 的磷酸盐缓冲溶液，体积为30～40 μL。

6.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述终止反应液为浓度为0.5～2 mol/L的H₂SO₄溶液，体积为40～100 μL。

7.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述显色液为浓度为0.1～0.3 mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）溶液，体积为50～100 μL。

8.权利要求1所述基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒的制备方法，步骤如下：

（1）化学合成第一适体，用0.01 mol/L， pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至100 μmol/L，振荡混合5～10分钟，再逐级稀释至1～5 μmol/L；

（2）化学合成第二适体，用0.01 mol/L， pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至100 μmol/L，振荡混合5～10分钟，再逐级稀释至1～5 μmol/L；

（3）配制浓度为0.2～1.0 mol/L 的KCl溶液、浓度为5～10 μmol/L的氯化血红素溶液、反应缓冲液、显色液、终止反应液，用0.01 mol/L、pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液配制链霉亲和素包被的磁珠；

（4）对步骤（1）第一适体、步骤（2）制得的第二适体、步骤（3）配制的KCl溶液、氯化血红素溶液、反应缓冲液、显色液、终止反应液以及链霉亲和素包被的磁珠进行装配，制得基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，KCl溶液为按如下步骤配制：

将KCl固体以超纯水配制为浓度1 mol/L KCl溶液，再以超纯水稀释至0.2～1.0 mol/L。

10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，氯化血红素溶液为按如下步骤配制：

采用二甲亚砜溶解并稀释至5～10 μmol/L。

11.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，反应缓冲液为按如下步骤配制：

称取NaH₂PO₄•2H₂O 0.5g，Na₂HPO₄•12H₂O 5.9g和NaCl 8.5g，加入超纯水1000 mL配制含有0.01 mol/L PO₄^3- 的pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液。