[发明专利]一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法

说明书

本发明涉及一种以橄榄油为原料制备鞘糖脂的方法，其特征在于采用以下步骤：A、以橄榄油为碳源，以斯达油脂酵母菌为菌种，温度为‑10℃‑20℃，摇床转速为100‑300r/min，培养24‑48h得到摇瓶菌种；B、配制种子培养基；C、配制发酵培养基；D、将摇瓶菌种接种到种子培养基中，接种体积分率为5‑10%，温度为37‑50℃，转速为150‑300r/min，振荡培养24‑36h，得种子培养液；E、取5‑15mL步骤D所得种子培养液接种到100‑150mL的发酵培养基中，于45‑75℃、150‑300r/min的条件下摇床振荡培养3‑6h；F、对培养液进行过滤精制，去除发酵培养基中的细胞及未发酵完全的底物烃或碳源物质，得含有鞘糖脂的溶液，经过冷冻干燥得含有鞘糖脂的粉末。本发明以橄榄油为原料，获得鞘糖脂的产率高、纯度高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法。

背景技术

橄榄油在地中海沿岸国家有几千年的历史，含有比任何植物油都要高的不饱和脂肪酸、丰富的维生素A、D、E、F、K和胡萝卜素等脂溶性维生素及抗氧化物等多种成分，并且不含胆固醇，因而人体消化吸收率极高。橄榄油中橄榄油富含与皮肤亲和力极佳的角鲨烯和人体必需脂肪酸，吸收迅速，有效保持皮肤弹性和润泽，而橄榄油中所含丰富的单不饱和脂肪酸和维生素E及酚类抗氧化物质，能消除面部皱纹，延缓肌肤衰老，有护肤护发和防治手足皴裂等功效。

糖类角质层屏障成分（Glycolipids）即糖脂，是糖类通过其还原末端以糖苷键与脂类连接起来的化合物，它是自然界中的一类在细胞膜上承担物质传输和能量传递的具有生理活性的重要物质。鉴于脂质部分的不同，糖脂可分为四类：含鞘氨醇的鞘糖脂；含甘油脂的甘油糖脂；含磷酸多菇醇衍生的糖脂；含类固醇衍生的糖脂。其中的鞘糖脂(GSLs)大多分布在细胞的膜结构中，由糖基和神经酰胺组成，其神经鞘氨醇骨架一侧通过糖苷键连有寡糖链，另一侧通过酰胺键与脂肪酸相连。

目前，通常采用有机全合成方法来制备GSLs，该方法的实验设计主要包括三大部分：糖供应体的合成、鞘氨醇的合成以及通过糖苷化反应获得产物GSLs，该化学合成方法步骤繁琐、产率低下、合成成本较高，且所涉及的试剂污染严重，这些缺陷都不利于工业化生产。而通过生物发酵方法来获得GSLs成为一种低污染、环境友好的高效生产方式。

GSLs与神经酰胺的作用类似，它和构成皮肤角质层的物质结构相近，都是在真核细胞的表面形成一层碳水化合物的网状结构，从而使肌肤达到锁水保湿的功效。其次，GSLs也是细胞脂质双层结构的重要组成部分，有修复肌肤屏障功能的作用。

发明内容

本发明所需解决的技术问题是：提供一种以橄榄油为原料，通过发酵来获得高附加值的鞘糖脂的方法，该方法获得鞘糖脂的产率高、纯度高。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种以橄榄油为原料制备鞘糖脂的方法，其特征在于采用以下步骤：

A、以橄榄油为碳源，以斯达油脂酵母菌（Lipomyces starkeyi 2.1608，中国科学院微生物研究所提供）为菌种，温度为-10℃-20℃，摇床转速为100-300r/min，培养24-48h得到摇瓶菌种；

B、按以下质量比配制种子培养基： DMEM培养基35-55%，橄榄油30-50%，甘露糖3-7%，麦芽糖5-12%，棉子糖3-6%，乳酸0.01-0.3%，酵母粉0.01-0.1%，谢氏丙酸杆菌0.01-0.05%，四氢嘧啶0.01-0.08%，磷酸盐缓冲液0.1-1.0%调整种子培养基PH到6.3-6.7；

C、按以下质量比配制发酵培养基：EMEM培养基58-90%，硝酸钠10-15%，钼酸铵14-20%，乳酸0.01-0.3%，酵母粉0.01-0.1%，谢氏丙酸杆菌0.01-0.05%，四氢嘧啶0.01-0.08%，磷酸缓冲液0.1-1.0%调节发酵培养基的PH到6.0-7.0；