[发明专利]检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的引物、检测试剂盒及其方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的引物， 还涉及检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的方法，尤其涉及检测草莓是否感染草 莓镶脉病毒的检测试剂盒。

背景技术

草莓病毒病主要表现出黄化和缩叶两种症状类型。草莓病毒病危害面广，在 世界草莓种植区出现的病毒病大约有20多种，其中侵染我国草莓的6种主要病 毒有：草莓斑驳病毒(Strawberrymottlevirus，SmoV)、草莓轻型黄边病毒 (Strawberrymildyellowedgevirus，SMTEV)、草莓镶脉病毒(Strawberryveinband virus，SVBV)、草莓皱缩病毒(Strawberrycrinklevirus，SCrV)、草莓轻型黄边伴随 病毒(strawberrymiIdyeIIowedge-associatedvirus，SYYEaV)和草莓潜隐环斑 病毒(strawberryIatentringspotvirus，SLRSV)，这6种病毒总侵染率达80.2％， 单病毒的侵染率达41.6％，两种及两种以上病毒的复合侵染率达30.6％。

病毒感染草莓后，会否产生病症主要取决于病毒的致病性和宿主的免疫力。

病毒病的致病机理主要在于三个方面：一是病毒粒体在宿主体内迅速繁殖， 不仅消耗了大量能量和蛋白质，而且占用了宿主的核糖体、tRNA、dNTPs等各 种资源用于合成子代病毒粒体，影响植株的生长发育和代谢；二是病毒粒体直 接损伤宿主细胞，比如释放子代病毒时破坏细胞膜，引发宿主防御机制启动导 致细胞凋亡，病毒基因整合至宿主基因组中从而改变细胞遗传特性导致细胞分 裂异常等；三是病毒粒体代谢时常产生多种醛类醌类大分子有毒物质，加速宿 主细胞的衰老和死亡，有时病毒粒体的代谢物还会激活某些氧化酶进而影响叶 绿体的生理功能。综合以上三个方面作用，最终导致感病植株生长缓慢，叶片 褪绿、繁殖力减弱、产量下降，果实畸形，死亡率升高等。

草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandingvirus，SVBV，又称StYVBV、StCVBV、 StEVBV)自然界中只能传染草莓，是草莓病毒中唯一一种属于花椰菜花叶病毒 属的双链DNA病毒，与CaMV有近亲缘关系，也是危害我国草莓生产的主要病 毒之一。典型镶脉症状只表现在指示植物森林草莓(F.vesca)和弗州草莓 (F.virginiana)上。SVBV为球形粒体，直径约45～50nm，DNA双链上各有一个缺 口，区别于其他花椰菜花叶病毒科家族成员。Petrizik等人完成了全世界首个的 SVBV全序列(GenBank登录号：X97304)测定工作，结果表明SVBV基因组全长 为7876bp，含有7个ORFs。

发明内容

本发明针对现有技术的缺点，公开了检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的引 物，公开了检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的方法；还公开了检测草莓是否感 染草莓镶脉病毒的检测试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。

检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的引物，设计的引物为：

SVBV4上游引物为CTAACTATCTTACACAGGGAAC，SVBV4下游引物为 GTCCGATCTCATTACAAATCCA；

SVBV6上游引物为ATCATACAAGAAGACCGCAAC，SVBV6下游引物为 TTTCACCACTCTAGCTGCCTC。本发明通过PCR反应体系进行琼脂糖凝胶电 泳，并以电泳图样中是否含有以上两个基因(草莓镶脉病毒外壳蛋白基因和第 六个阅读框基因)的目的条带确定草莓植株是否感染草莓镶脉病毒(SVBV)。

检测草莓是否感染草莓镶脉病毒的方法，包括，

步骤一.设计的引物为：

SVBV4上游引物为CTAACTATCTTACACAGGGAAC，SVBV4下游引物为 GTCCGATCTCATTACAAATCCA；

SVBV6上游引物为ATCATACAAGAAGACCGCAAC，SVBV6下游引物为 TTTCACCACTCTAGCTGCCTC；

步骤二.提取草莓样品的DNA，加入草莓样品DNA、设计的引物以PCR 法进行样品DNA的扩增和检测；