[发明专利]miRancer分子的设计与应用

说明书

技术领域

本发明涉及RNA分子及其用途。具体而言，本发明涉及能够特异性结合和增强microRNA的表达及活性的寡聚RNA分子及其用途。

背景技术

成熟的microRNA(miRNA)是一类长度约22个核苷酸(nt)(例如约18-25个核苷酸)的小RNA，在细胞内具有多种重要的调节作用。miRNA广泛存在于真核生物中，它们能够与那些和它的序列互补的mRNA分子相结合发挥功能(例如导致基因的沉默)，这是调节基因表达的一个重要策略。研究结果表明，miRNA参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动，可以在疾病特别是癌症的诊断和治疗中发挥作用。

发明内容

在一些实施方案中，本文提供一种结合目标microRNA的单链RNA序列，优选的所述单链RNA序列增强目标microRNA的活性(在本文中称为miRancer分子)，所述单链RNA序列具有5'端臂和3'端臂，所述5'端臂通过碱基互补配对与目标microRNA结合，所述3'端臂通过碱基互补配对与所述5'端臂结合，

所述单链RNA序列从5'端到3'端具有以下通式1：

(n_5-11)(n_0-3)(n_6-7)(n₁)(n_11-21)(n_0-2)，

其中n为连续的核苷酸或其类似物，其后数字为核苷酸或其类似物的个数，每个n可以彼此独立地选自下述核苷酸：A，U，G和C，或其核苷酸类似物，其中n₁与目标microRNA的5'端第一位的核苷酸互补，相应的n_6-7对应于目标microRNA从5'端到3'端的第2-7位或第2-8位，从而(n_5-11)(n_0-3)(n_6-7)为5'端臂，(n_11-21)(n_0-2)为3'端臂，其中n_0-3为插入的C或G 以在所述5'端臂和3'端臂之间形成GC配对。

在一些实施方案中，本文提供的所述单链RNA分子能够结合目标microRNA和增强所述microRNA的活性。发明人将所述可以增强microRNA活性的RNA分子称为microRNA增强子(microRNA enhancer)，简称miRancer。所述增强microRNA活性可以包括例如稳定所述microRNA，延长所述microRNA的半衰期，改变所述microRNA所调节的靶基因表达等方面中的一种或多种。测量microRNA和microRNA所调节的靶基因表达的方法是本领域已知的。

在一些实施方案中，本文描述的RNA分子中除了插入的(n_0-3)作为缺口不计算同一性之外，所述5'端臂与所述目标microRNA从5'端到3'端的第2-18位核苷酸的互补链至少50％、60％、70％、80％、90％、或100％的同一性，优选其中(n6-7)与所述目标microRNA从5'端到3'端的第2-7位或第2-8位核苷酸的互补链具有至少80％、90％、或100％的同一性，优选(n_11-21)与(n_5-11)(n_0-3)(n_6-7)中不配对核苷酸的个数小于6、5、4、3、2、或1对，优选全部不配对的核苷酸在(n₁)周围。在一些实施方案中，(n_5-11)(n_0-3)(n_6-7)与所述目标microRNA从5'端到3'端的第2-18位核苷酸至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％互补。在一些实施方案中，(n6-7)与所述目标microRNA从5'端到3'端的第2-7位或第2-8位核苷酸至少80％、90％、95％、99％或100％互补。在一些实施方案中，(n_11-21)与(n_5-11)(n_0-3)(n_6-7)至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％互补。

在一些实施方案中，本文提供一种包含所述单链RNA序列的载体，如质粒。

在一些实施方案中，本文提供一种包含所述单链RNA序列的多核苷酸序列的载体，如质粒。

在一些实施方案中，本文提供一种所述单链RNA序列的合成的或重组的RNA分子。