[发明专利]一种曲马多检测抗原及其制备方法

说明书

本发明涉及一种曲马多检测抗原，其结构通式如下：其中，m＝1，2，3，4，5。以及曲马多检测抗原的制备方法，以曲马多为原料，首先将曲马多苯环上O位去甲基，然后通过溴丁酸乙酯在O‑去甲曲马多的O位上引出羧基，再脱去乙酯，通过羧基与大分子蛋白偶联。本发明的合成制备工艺中所使用的材料和催化剂均为普通产品，因此更具实用性，适于工业生产并能产生经济价值；本发明没有用到氯仿，毒性较低，更具有安全性。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域；具体涉及利用化学合成方法从曲马多开始合成去甲曲马多及其衍生物，再与大分子蛋白偶联制成曲马多检测抗原的制备方法。

背景技术

下面的背景技术用于帮助读者理解本发明，而不能被认为是现有技术。

曲马多(Tramadol)是一种非阿片类中枢性镇痛药，对μ-阿片类受体的亲和力相当于吗啡的1/6000对κ和δ受体的亲和力仅为μ受体的1/25。盐酸曲马多由德国格兰泰公司研制开发，于1977年首先在德国上市，目前已在包括我国在内的许多国家上市，得到了广泛的临床应用。曲马多可口服给药、直肠内给药、肌肉注射或静脉缓慢注射，或稀释后静脉内滴注。曲马多主要作用于中枢神经系统，用药过量会产生依赖，对人体的作用类似吗啡和海洛因。曲马多可用于治疗中等至严重的疼痛。有研究表明，曲马多对去甲肾上腺素和血清张力素系统的作用以及减轻痛感的作用，可以减轻抑郁症和焦虑症的痛苦。

作为目前唯一一种非阿片类中枢性镇痛药，由于其镇痛效果强大而成瘾性低故而在临床上得到广泛使用。多见用于各种术后止痛、癌痛、分娩痛等的治疗，随着对其研究的深入，在抗寒战、止咳及其他一些治疗方面，曲马多均发挥了极大的作用。

但随着曲马多的广泛使用，曲马多成瘾的问题引起关注。据有关资料显示，正常人如每天服用曲马多200毫克，大约半年后会产生药物依赖，而如果每天服用300到400毫克(6到8颗药)甚至更多，可在短期内上瘾。2008年，中国将盐酸曲马多作为精神药品进行管制。

因此进行曲马多滥用检测的相关试剂及其产品的开发就成为需要。

发明内容

本发明以曲马多为原料合成半抗原，从苯环上的O位接上交联臂再与具有免疫原性的蛋白质偶联，以此来获得具有反应原性和免疫原性的完全抗原；将这一抗原应用于检测卡中来进行曲马多是否滥用的检测。为了获得针对半抗原的特异性抗体，交联臂一般要遵循两个原则：①尽量不要具备复杂的结构，一般以烃链为佳，这样可以尽量避免产生抗交联臂的抗体；②要具备一定的长度，一般为1-10个原子，最好是1-6个，这样可以将半抗原暴露在蛋白质的外表，而不是被蛋白质遮掩住。因此合成的免疫抗原选择的交联剂一般是溴乙酸乙酯、溴丁酸乙酯或溴己酸乙酯等，再通过脱乙酯与蛋白质上的氨基反应，其交联臂为结构简单的烃链，长度为4-8个原子。

具体来说,本发明提供的一种曲马多检测抗原，其结构通式如下：

其中，m＝1，2，3，4，5

一些优选的实施方式中，大分子蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、牛γ-球蛋白(BGG)或鸡卵清蛋白(OVA)。

另一方面，本发明提供的曲马多检测抗原的制备方法，具体是：以曲马多为原料，首先将曲马多苯环上O位去甲基，然后通过溴丁酸乙酯在O-去甲曲马多的O位上引出羧基，再脱去乙酯，通过羧基与蛋白质偶联；其反应式如下：

反应式一：

反应式二：

其中，产物1：去甲曲马多，

产物2：4-(3-(-((二甲基氨基)甲基)-羟基环己基)苯氧基)丁酸乙酯，

产物3：4-(3-(-((二甲基氨基)甲基)-羟基环己基)苯氧基)丁酸，