[发明专利]一种曲马多检测抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种曲马多检测抗原，其特征在于，其结构通式如下：

其中，m＝1，2，3，4，5。

2.根据权利要求1所述的曲马多检测抗原，其特征在于，大分子蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、牛γ-球蛋白(BGG)或鸡卵清蛋白(OVA)。

3.一种如权利要求1或2所述的曲马多检测抗原的制备方法，其特征在于，以曲马多为原料，首先将曲马多苯环上O位去甲基，然后通过溴丁酸乙酯在O-去甲曲马多的O位上引出羧基，再脱去乙酯，通过羧基与大分子蛋白偶联；其反应式如下：

反应式一：

反应式二：

其中，产物1：去甲曲马多，

产物2：4-(3-(-((二甲基氨基)甲基)-羟基环己基)苯氧基)丁酸乙酯，

产物3：4-(3-(-((二甲基氨基)甲基)-羟基环己基)苯氧基)丁酸，

产物4：曲马多抗原。

4.根据权利要求书3所述的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

(1)在氩气保护下，将曲马多和蛋氨酸溶解在甲磺酸中，室温搅拌反应48-96h；反应完成后用NaOH调PH至11-12后用乙酸乙酯萃取，干燥，过滤，旋转蒸发仪拉干，柱层析提纯，得到产物1；其中，曲马多和蛋氨酸摩尔比为1:2～1:6；

(2)将产物1溶于乙腈中，加入溴代烷烃酯和碳酸钾，回流12～16小时；反应结束后过滤，干燥，旋转蒸发仪拉干，得到产物2；其中，产物1和溴代烷烃酯摩尔比为1:1.2～1.5；

(3)将产物2溶解于甲醇中，加入4N NaOH，室温搅拌8-16H，反应结束以后加入阳离子树脂搅拌，检测PH<7后过滤，旋转蒸发仪拉干，柱层析纯化得产物3；其中，甲醇和4N NaOH体积比为5:1；

(4)将产物3，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶解于氮氮二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌8H。然后滴入蛋白溶液中，搅拌过夜得到产物4；其中，产物3，DEC，NHS比例为1:1.2～1.5:1.2～1.5。