[发明专利]一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及试剂盒

说明书

一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及试剂盒，该方法是于样品中加入蛋白质和DNA双抽提液，充分研磨至样品细胞完全破碎；然后取等体积的2份样品，一份样品加入DNA增溶剂混匀，水浴后冷却，然后加入等体积的氯仿：酚(24:1)并充分混匀，静置后充分离心，取上清液检测DNA含量；另一份样品加入蛋白酶抑制剂后静置，充分离心，取上清液测定蛋白质含量；蛋白质含量与DNA含量的比值即为细胞内蛋白质相对含量[mg(protein)/mg(DNA)]。本发明提出了细胞内蛋白质相对含量的概念，基于该概念的检测方法及检测试剂盒具有无需称量样品或计算细胞数量，同份样品同时检测蛋白质和DNA，适宜各种复杂样品，操作简单，成本低廉等优点。

技术领域

本发明属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及检测试剂盒。

背景技术

检测细胞内蛋白质可以观察细胞的基因表达情况，评价细胞的生长状态等。因此，细胞内蛋白质含量是生物学、医学、农学等领域常见的测定指标。但由于在测定蛋白质含量时会遇到样品数量少、样品细胞无法计数、样品不均一、样品间差异明显等问题，导致测定出的结果无法真实表现细胞内蛋白质含量。因此，需要对不同样品的蛋白质含量进行标准化处理。

早先对不同样品的蛋白质含量进行标准化处理有多种，但均存在诸多不足。总结起来，常用的方法有：(1)烘干样品，之后计算干重样品的蛋白质含量进行标准化处理。但该方法需要烘干大量的样品才可以准确的称量，样品数量少时无法采用该方法。(2)计数细胞的数量，之后计算每个细胞的蛋白质含量进行标准化处理。(3)检测某种特定蛋白含量，以某种特定的蛋白质为衡定值进行标准化处理，例如用Actin。但特定的蛋白在表达及降解方面也会受到特定因素的影响，导致样品不均一或样品间差异明显。

最近公开的中国专利201510118767.9的一种测定细胞内蛋白质含量标准化的新方法，建立了一种基于细胞内DNA含量具有相对稳定性的特点，通过测定DNA含量计数细胞数量来标准化细胞内蛋白质含量。但是该方法存在以下不足：(1)过程复杂，需要制作细胞标准曲线，技术本质依然属于计数细胞数量来标准化蛋白质含量的范畴；(2)需要用已知浓度的细胞溶液制作标准曲线，组织、器官和个体等无法计算细胞的样品标准化蛋白质标含量时，无法采用该方法；(3)未体现检测蛋白质含量和DNA含量采用同份样品的特点，取材有差异的可能依然存在；(4)需要贵重、精密的仪器，采用荧光分光光度计检测DNA含量。

细胞内DNA的量具有很好的稳定性，而蛋白质的量则具有波动性。细胞内蛋白质的量与DNA的量的比值称为细胞内蛋白质相对含量[mg(protein)/mg(DNA)]。本发明基于细胞内蛋白质相对含量的概念建立了蛋白质含量标准化的检测方法及检测试剂盒，该方法及试剂盒具有无需称量样品或计算细胞数量，同份样品同时检测蛋白质和DNA，适宜各种复杂样品，操作简单，成本低廉等优点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术中存在的上述不足，提供一种操作简单、成本低廉的快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及试剂盒。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法，该方法步骤如下：

(1)按0.1g样品加2mL蛋白质和DNA双抽提液的比例，于样品中加入蛋白质和DNA双抽提液，充分研磨样品至样品细胞全部破碎，得样品溶液；

(2)吸取2份等体积的样品溶液，其中一份样品溶液中加入为样品溶液体积1/2的DNA增溶剂，于50-100℃水浴10-30min，冷却至室温，然后加入与样品溶液等体积的氯仿与酚的体积比为24:1的混合液，混合均匀，静置5-10min，离心，取上清液检测DNA含量；其中，DNA增溶剂为3-6mol/L NaCl；

(3)另一份样品溶液中加入蛋白酶抑制剂，该蛋白酶抑制剂的加入量为每1mL样品溶液加入30μl蛋白酶抑制剂，静置10-30min，离心，取上清液测定蛋白质含量；