[发明专利]一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法，其特征在于，该方法步骤如下：

(1)按0.1g样品加2mL蛋白质和DNA双抽提液的比例，于样品中加入蛋白质和DNA双抽提液，充分研磨样品至样品细胞全部破碎，得样品溶液；其中，蛋白质和DNA双抽提液是取1mol/L pH为8.0的Tris-HCl 1mL和0.5mol/L pH为8.0的EDTA 0.2mL混匀，用超纯水定容到100mL得到；

(2)吸取2份等体积的样品溶液，其中一份样品溶液中加入DNA增溶剂，该DNA增溶剂的加入量为样品溶液体积的1/2，于50-100℃水浴10-30min，冷却至室温，然后加入与样品溶液等体积的氯仿与酚的体积比为24:1的混合液，混合均匀，静置5-10min，离心，取上清液检测DNA含量；其中，DNA增溶剂为3-6mol/L NaCl；

(3)另一份样品溶液中加入蛋白酶抑制剂，该蛋白酶抑制剂的加入量为每1mL样品溶液加30μl蛋白酶抑制剂，静置10-30min，离心，取上清液测定蛋白质含量；

(4)计算蛋白质含量与DNA含量的比值，蛋白质含量与DNA含量的比值即为样品细胞内蛋白质相对含量。

2.如权利要求1所述的一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法，其特征在于，所述步骤(1)中蛋白质和DNA双抽提液分两次加入，第一次于样品中先加入蛋白质和DNA双抽提液总体积的一半，充分研磨，再于样品中加入剩余的蛋白质和DNA双抽提液，充分研磨至样品细胞完全破碎。

3.如权利要求1所述的一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的蛋白酶抑制剂是取PMSF 1.742g溶于100mL乙醇中制得X液，再取pepstatin A9.603mg溶于100mL乙醇中制得Y液，取X液和Y液各10mL混匀，即得。

4.一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如下组分：

蛋白质和DNA双抽提液：取1mol/L pH为8.0的Tris-HCl 1mL和0.5mol/L pH为8.0的EDTA 0.2mL混匀，用超纯水定容到100mL；

DNA增溶剂：3-6mol/L的NaCl溶液；

体积比为24：1的氯仿和酚的混合液；

蛋白酶抑制剂：取PMSF 1.742g溶于100mL乙醇中制得A液，再取pepstatin A 9.603mg溶于100mL乙醇中制得B液，取A液和B液各10mL混匀；

蛋白质检测液：取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95％质量浓度的乙醇中,再加入120mL 85％质量浓度的磷酸,稀释定容至1000mL。