[发明专利]一种重组蛋白Vo及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201610068623.1 | 申请日： | 2016-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN105601751B | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 顾江;魏超;顾浩;赵莉群;杨峰;高晨;敬海明;邹全明 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/63;G01N33/68;G01N33/569;A61K39/108;A61P31/04 |
| 代理公司： | 重庆志合专利事务所(普通合伙) 50210 | 代理人： | 胡荣珲 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 蛋白 vo 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组蛋白Vo，其特征在于，所述重组蛋白Vo由脑膜炎大肠杆菌K1的外膜蛋白A(OmpA)的膜外片段通过连接肽融合而成；所述重组蛋白Vo具有以下通式：
loop1-(linker a)n1-loop2-(linker b)n2-loop3-(linker b)n3-loop4-(linker a)n4-loop1-(linker a)n5-loop2-(linker b)n6-loop3-(linker b)n7-loop4；
其中，所述连接肽linker a为GlySerGlyGlySer；所述连接肽linkerb为GlySerGlyGlySerGly；n1、n2、n3、n4、n5、n6、n7各自独立地选为1；
所述loop1的氨基酸序列为SEQ ID NO:3，所述loop2的氨基酸序列为SEQ ID NO:4，所述loop3的氨基酸序列为SEQ ID NO:5，所述loop4的氨基酸序列为SEQ ID NO:6。
2.如权利要求1所述的重组蛋白Vo，其特征在于，编码所述重组蛋白Vo的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。
3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体由骨架质粒可修饰地连接编码权利要求1或2所述的重组蛋白Vo的核苷酸序列形成。
4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述骨架质粒选自pGex系列载体、pET系列载体或pQE系列载体。
5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述骨架质粒为pGex-6P-2。
6.一种如权利要求1或2所述的重组蛋白Vo的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
1)构建如权利要求3或4所述的表达载体；
2)将步骤1)得到的表达载体转化至宿主菌，得到含有表达载体的宿主菌；
3)诱导步骤2)得到的含有表达载体的宿主菌表达重组蛋白Vo；
4)提取并纯化得到重组蛋白Vo。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主菌选自大肠杆菌XL1-blue、BL21或HMS174菌株中的一种。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌XL1-blue菌株。
9.如权利要求1或2所述的重组蛋白Vo在制备用于诊断、预防或治疗由大肠杆菌K1引起的脑膜炎的药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物为用于诊断由大肠杆菌K1引起的脑膜炎的试剂盒。
11.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物为用于预防或治疗由大肠杆菌K1引起的脑膜炎的亚单位疫苗。
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