[发明专利]脂蛋白磷脂酶A2检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检测领域，涉及一种脂蛋白磷脂酶A2检测试盒。

背景技术

脂蛋白磷脂酶A2(1ipoprotein-associatedphospholipaseA2，Lp-PLA2)是近年来引起广泛关注的一种与动脉硬化和缺血性心脑血管疾病密切相关的磷脂酶A2超家族、一种新的炎症标记物和一种独立危险因子。它的分子量为45KD，由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节。脂蛋白磷脂酶A2具有促炎症的作用，因此Lp-PLA2从炎症细胞中产生和释放也可以被解读成为一个极佳的前炎症反应指标。Lp-PLA2在血管壁内产生氧化分子，它更易于导致动脉粥样硬化和产生不稳定性斑块。Lp－PLA2水平的升高预示着有斑块形成和破裂的很大危险性，并且不依赖其他脂类和CRP水平。通过检测循环系统中的Lp-PLA2水平，可以独立的预测心脑血管的病发。

目前常用的测定脂蛋白磷脂酶A2蛋白的方法有荧光免疫层析法、酶联免疫吸附法、上转发光法、胶乳增强免疫比浊法。其中大多数方法都无法准确进行定量测定，只有胶乳增强免疫比浊法可以用于准确定量测定，它的基本原理是：将抗体包被在胶乳颗粒上，在与相应抗原发生免疫反应后，能够形成聚集颗粒，在一定波长条件下，聚集颗粒形成的浊度与相应抗原有比例关系，因此通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出样本中待检抗原的含量。目前将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体包被到胶乳颗粒上的常用方法是物理吸附法或者随机方向偶联法，这些方法稳定性较差，抗体使用量大导致试剂成本高，而且容易受类风湿因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，IgM、IgG型RF或者嗜异性抗体可以与包被在胶乳上的抗体的Fc段相结合，导致检测测值假性升高。

发明内容

本发明的目的是提供一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2，试剂R1包括缓冲液、稳定剂、电解质、表面活性剂和防腐剂；试剂R2包括偶联抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒、缓冲液、稳定剂、表面活性剂和防腐剂。

在本发明的一个实施方案中，所述缓冲液包括但不限于PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液、氯化铵缓冲液以及其他具有相似性质的缓冲液中的一种或者几种。

在本发明另一个实施方案中，所述防腐剂包括但不限于苯甲酸钠、亚硝酸钠、Proclin300、山梨酸钾、叠氮钠以及其他具有类似性质的防腐剂中的一种或几种。所述稳定剂包括但不限于聚乙二醇、丙二醇、蔗糖、丙三醇、山梨醇、BSA、海藻糖以及其他具有类似性质的稳定剂中的一种或者几种。

在本发明又一个实施方案中，所述电解质包括但不限于氯化钠、氯化钾、氯化钙以及其他具有类似性质的电解质中的一种或者几种。所述表面活性剂包括但不限于SPAN系列表面活性剂、TRITON系列表面活性剂、TWEEN系列表面活性剂以及其他具有类似性质的表面活性剂中的一种或者几种。

在本发明优选的实施方案中，所述R1试剂为含5g/LPEG8000（聚乙二醇8000），10g/L氯化钠，8g/L的蔗糖，5g/L的吐温20，1g/L叠氮钠的0.25M氯化铵缓冲液，pH值为9.0。

所述R2试剂为中含有1g/L的偶联抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒，15g/L的蔗糖，2g/L的叠氮钠的0.1M氯化铵缓冲液；pH值为9.0。

在本发明中，所述偶联抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒的制备步骤如下：

（1）聚苯乙烯胶乳颗粒的激活：在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺，混合均匀，反应结束后加入己二酸二酰肼，继续反应，得到激活的聚苯乙烯胶乳颗粒；

（2）抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的氧化：用高碘酸钠将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体Fc端糖链上的羟基氧化成醛基；

（3）抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的偶联：将步骤（1）激活的聚苯乙烯胶乳颗粒和步骤（2）氧化的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体混合进行反应，反应结束后，加入葡萄糖封闭聚苯乙烯胶乳颗粒上没有发生反应的集团，获得偶联抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒。

本发明上述制备方法各个步骤中物料配比为：

步骤（1）中乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺：聚苯乙烯胶乳颗粒=0.1-1:100（重量）；己二酸二酰肼：聚苯乙烯胶乳颗粒=10-50:100（重量）；所述聚苯乙烯胶乳颗粒粒径介于100nm-300nm之间。

步骤（2）中高碘酸钠:抗脂蛋白磷脂酶A2抗体=1:2（重量）；