[发明专利]一种EMSA方法及其探针和该探针的制备方法有效
| 申请号： | 201610059545.9 | 申请日： | 2016-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN105506150B | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 董先辉;王晓香;曾健;张娟;杨嘉杰;周剑 | 申请（专利权）人： | 广州伯信生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6804 | 分类号： | C12Q1/6804;C12Q1/6811;C12N15/11;C12N15/10;G01N33/53;G01N33/561 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 马丽丽 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 emsa 方法 及其 探针 制备 | ||
1.一种EMSA探针的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
合成模板链和生物素标记且LNA修饰的引物，所述模板链包含转录因子结合序列和位于其5’及3’端的接头序列，所述接头序列为回文序列，所述引物的核苷酸序列与接头序列的核苷酸序列相同；采用该引物以模板链为模板进行PCR扩增合成双链EMSA探针。
2.根据权利要求1所述的EMSA探针的制备方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：1μM模板链1μL，10μM Biotin-LNA-Oligo2μL，dNTP Mix 4μL，DNA Polymerase 0.25μL，10×PCRreaction buffer 5μL，ddH2Oto 50μL；所述PCR反应条件为：94℃5min；95℃10sec，55℃20sec，72℃8sec，35循环；72℃10min。
3.一种根据权利要求1所述的EMSA探针的制备方法制得的EMSA探针，其特征在于，包含第一条链，所述第一条链包含转录因子结合序列和位于其5’及3’端的接头序列，所述接头序列为回文序列；
所述EMSA探针还包含与第一条链探针互补的第二条链，所述接头序列经生物素标记和LNA修饰。
4.根据权利要求3所述的EMSA探针，其特征在于，所述接头序列的长度为8-15nt。
5.根据权利要求4所述的EMSA探针，其特征在于，所述接头序列为GGGTCTAGACCC、GCATCATGATGC或GGGCTAGCCC。
6.根据权利要求5所述的EMSA探针，其特征在于，所述第一条链的序列为GGGTCTAGACCCGTGTCHGKCTRGGGTCTAGACCC、GCATCATGATGCAGTTGGAAATYCCTCCCAGGCGCATCATGATGC或GGGCTAGCCCTCCGTGTTCTGACTCTTGAGGGTCTTCGGGCTAGCCC，其中H＝A/C/T，K＝G/T，R＝A/G，Y＝C/T。
7.根据权利要求3所述的EMSA探针，其特征在于，所述转录因子结合序列含有简并序列。
8.一种非诊断目的的EMSA方法，使用权利要求3所述的EMSA探针进行EMSA。
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