[发明专利]用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织工程领域，特别涉及一种用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片 及其制备方法。

背景技术

皮肤是人体与外界环境接触的屏障，不仅起保护、分泌、代谢和感觉等 作用，而且参与免疫反应和维持机体内环境的稳定。作为人体最表露的皮肤， 其受损伤及大面积烫烧伤意外的发生率较高。早期的烧伤创面覆盖可以抑制 细菌生长、预防感染、防止水分及电解质的丢失；自体皮肤移植是治疗烧伤 的首选，但是对于大面积烧伤，自体皮肤不能满足需求，且疗程周期较长， 治疗过程中，皮肤创口易出现感染；而异体皮基质肤则会引起明显的免疫排 斥反应；而移植人造皮肤，皮下的分泌物易形成水疱，进而对人造皮肤造成 损伤，且人造皮肤较昂贵，制作工艺较复杂。因此，截至目前，严重创伤和 大面积烧伤患者的皮源缺乏仍然是临床亟待解决的难题。

目前，组织工程化皮肤的研究已成为生命科学研究领域的热点之一，而 市场上也已出现用于临床的组织工程皮肤产品，虽有一定的临床效果，但不 仅价格昂贵，技术操作繁琐，有一定的技术难度且成本造价较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中采用异体皮基质修复皮 肤烧伤创口易引起免疫排斥反应且疗效效率低等缺陷，提供一种能够避免免 疫排斥反应且修复效果较好的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种用于治疗皮肤烧 伤的皮肤贴片的制备方法，包括以下步骤：

分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；

将所述脂肪干细胞与胶原溶液混合后接种于所述异体皮基质；

其中，所述脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的终浓度为(2～4)×10⁴个/ml。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述胶原 溶液中，胶原的质量分数为0.1～0.3％。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的获取过程，包括以下步骤：

无菌条件下，取所述皮肤烧伤患者的脂肪组织，剔除脂肪中肉眼可见的 血管和纤维部分，经PBS溶液清洗后，剪碎，酶解振荡消化20～60分钟，用 完全培养基中止消化，再置于冰浴中吹打消化10～20分钟，过滤，去除未消 化的脂肪组织和结缔组织后，对滤液进行离心，去除上层油滴，取下层脂肪 细胞，PBS清洗后，即获得原代脂肪干细胞。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的获取过程还包括以下步骤：

洗涤所述原代脂肪干细胞，去除红细胞，用完全培养基重悬，然后接种 于多聚鸟氨酸包被的培养板上，培养2～6小时，移去上清液后胰酶消化，去 除未消化的成纤维细胞和内皮细胞，即获得纯化后的原代脂肪干细胞。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的获取过程还包括以下步骤：

取纯化后的原代脂肪干细胞以0.5～2×10⁵个/ml的密度接种于DMEM培 养基进行扩增培养7～10天，每隔2-3天换液一次。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述 DMEM培养基中添加有2～5％人血清、5～15ng/ml的ITS、50～150U/ml的链霉 素、50～150U/ml青霉素、5～35ng/ml的EGF和5～15ng/ml的LIF。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述异体 皮基质的获取过程，包括以下步骤：

取健康猪腹部或背部皮进行脱脂脱毛处理，去掉0.2～0.6mm的表皮，制 成厚度为0.2～0.4mm的真皮层皮片，清洗后消毒20～40分钟，反复清洗，于 消化液中消化2～4天，反复清洗皮片，然后加入非离子型表面活性剂孵育2～4 天，至细胞成分完全去除，获得脱细胞真皮，然后分别用氯化钠和PBS反复 冲洗，即获得异体皮基质。

在本发明提供的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述消化 液中包含有质量百分数为0.10～0.40％胰蛋白酶、0.01～0.03％乙二酸乙二胺和 0.01～0.03％氢氧化钠。

本发明还提供一种用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片，由上述用于治疗皮肤 烧伤的皮肤贴片制备方法所获得的。