[发明专利]用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法

权利要求书

1.一种用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其特征在于，包括以 下步骤：

分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；

将所述脂肪干细胞与胶原溶液混合后接种于所述异体皮基质；

其中，所述脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体。

2.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的终浓度为(2～4)×10⁴个/ml。

3.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述胶原溶液中，胶原的质量分数为0.1～0.3％。

4.根据权利要求2所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的获取过程，包括以下步骤：

无菌条件下，取所述皮肤烧伤患者的脂肪组织，剔除脂肪中肉眼可见的 血管和纤维部分，经PBS溶液清洗后，剪碎，酶解振荡消化20～60分钟，用 完全培养基中止消化，再置于冰浴中吹打消化10～20分钟，过滤，去除未消 化的脂肪组织和结缔组织后，对滤液进行离心，去除上层油滴，取下层脂肪 细胞，PBS清洗后，即获得原代脂肪干细胞。

5.根据权利要求4所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的获取过程还包括以下步骤：

洗涤所述原代脂肪干细胞，去除红细胞，用完全培养基重悬，然后接种 于多聚鸟氨酸包被的培养板上，培养2～6小时，移去上清液后胰酶消化，去 除未消化的成纤维细胞和内皮细胞，即获得纯化后的原代脂肪干细胞。

6.根据权利要求5所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的获取过程还包括以下步骤：

取纯化后的原代脂肪干细胞以0.5～2×10⁵个/ml的密度接种于DMEM培 养基进行扩增培养7～10天，每隔2-3天换液一次。

7.根据权利要求6所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述DMEM培养基中添加有2～5％人血清、5～15ng/ml的ITS、 50～150U/ml的链霉素、50～150U/ml青霉素、5～35ng/ml的EGF和5～15ng/ml 的LIF。

8.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述异体皮基质的获取过程，包括以下步骤：

取健康猪腹部或背部皮进行脱脂脱毛处理，去掉0.2～0.6mm的表皮，制 成厚度为0.2～0.4mm的真皮层皮片，清洗后消毒20～40分钟，反复清洗，于 消化液中消化2～4天，反复清洗皮片，然后加入非离子型表面活性剂孵育2～4 天，至细胞成分完全去除，获得脱细胞真皮，然后分别用氯化钠和PBS反复 冲洗，即获得异体皮基质。

9.根据权利要求8所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其 特征在于，所述消化液中包含有质量百分数为0.10～0.40％胰蛋白酶、 0.01～0.03％乙二酸乙二胺和0.01～0.03％氢氧化钠。

10.一种用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片，其特征在于，由权利要求1-9 任一项所述的用于治疗皮肤烧伤的皮肤贴片制备方法所获得的。