[发明专利]阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的分离与测定方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的分离与测定方法。

背景技术

阿普斯特为磷酸二酯酶PDE4抑制剂，用于治疗类风湿性关节炎、银屑病关节炎、Crohn病、溃疡性结肠炎。阿普斯特的中文名为：(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮，英文名为：(+)-2-[1-(3-ethoxy-4-methoxyphenyl)-2-methanesulfonylethyl]-4-acetyl-aminoisoindoline-1,3-dione，其结构式如式Ⅱ所示：

基因毒性杂质是指能直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌作用的物质。在药物活性物质中没有出现的基因毒性反应物和有基因毒性结构的物质，被称为潜在基因毒性杂质。在生产过程中，可能产生基因毒性杂质的环节包括新药合成、原料纯化、储存运输(与包装物接触)等，故在新药合成阶段应该指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化学物质，如所用试剂、中间体、副产品等。更进一步，在药物活性物质中没有出现的基因毒性反应物和有基因毒性结构的物质，都应该被考虑。具有毒性作用的基团一般具有亲电试剂的性质，这些基团在生理条件下同体内核 酸、蛋白质或其他重要成分中的亲核中心发生取代反应，使这些成分发生不可逆的损伤，表现为毒性、致突变或致癌等作用。表现为毒性、致突变或致癌等作用的基团举例如下：

在阿普斯特的合成中，其合成使用的原料SM₁具有醛基警示结构，这使最终获得的阿普斯特中含有的潜在基因毒性杂质，它的结构式如式Ⅰ所示：

为了控制阿普斯特的质量，需要对阿普斯特及其潜在基因毒性杂质进行分离测定。但是，目前还没有分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的高效液相色谱方法。本发明对分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的高效液相色谱方法进行了探索。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，该方法能够有效实现阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的分离与测定。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，所述的方法是采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，进样，然后采用流动相进行洗脱分离并测定。

本发明所述的方法适用于阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的分离与测定，可用于单独分离某一种杂质，也可同时分离阿普斯特及多种潜在基因毒性杂质。

所述的阿普斯特的结构式如式Ⅱ所示：

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，所述潜在基因毒性杂质包括如式Ⅰ所示的潜在基因毒性杂质SM₁：

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性 杂质的方法，所述流动相为乙腈与0.08-0.15％磷酸水溶液的混合液，优选乙腈与0.1％磷酸水溶液的混合液为流动相。

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，所述流动相中乙腈与0.08-0.15％磷酸水溶液的体积比为40-55：45-60，优选体积比为48：52。

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，所述色谱柱柱温为30℃，进样量为20μl，优选色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm。

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，在洗脱分离后，用紫外检测器对阿普斯特及其潜在基因毒性杂质进行检测。

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，紫外检测波长为230nm±5nm。

进一步，所述的高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的方法，所述流动相的流速为0.5-1.5ml/min，优选流动相的流速为1.0ml/min。

本发明的方法不仅能够实现阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的有效分离，而且能够准确测定阿普斯特及其潜在基因毒性杂质的含量。