[发明专利]脂肪干细胞的制备及应用

权利要求书

1.一种脂肪干细胞的制备方法，其特征在于：

(1)脂肪干细胞分离：去除抽取的人体脂肪组织的下层血性肿胀液，将脂肪以500G离 心3-5分钟，去除离心后脂肪上层油脂和底层血性液体，获取中层纯脂肪，按体积比1:1加入 0.1％胶原酶溶液充分混匀后放入37℃摇床，并以200rpm消化30-40分钟，消化结束后再以 800G离心5-10分钟后获得干细胞沉淀，加入对应的患者血清10ml，充分混匀后加入以干细 胞沉淀和生理盐水的体积比1:5加入生理盐水，再以300G离心3-5分钟，离心后去除上层溶 液，剩余底部沉淀，以体积比1:7加入生理盐水，再以300G离心3-5分钟，重复3遍后，将 最后得到沉淀通过100μm滤器过滤，得到的滤液为脂肪干细胞溶液。

(2)脂肪干细胞培养：将脂肪干细胞加入由10％胎牛血清、1％青霉素及1％链霉素原 液构成的高糖DMEM培养基重悬，并用100目滤网过滤，将细胞悬液接种于培养瓶中，在 37℃、饱和湿度、5％CO₂培养箱中培养。48小时后换液，去除未贴壁细胞，此后每72小时 换液1次，至细胞融合至80％后弃去原培养液，PBS洗涤1次，加入适量0.25％胰蛋白酶 +0.03％EDTA进行消化3-5分钟，加入高糖DMEM培养基终止消化，以800r/min离心5 分钟，用含10％胎牛血清、1％青霉素及1％链霉素原液构成的高糖DMEM培养基重悬沉积 细胞，按1:2的比例进行传代，当传代细胞生长接近单层融合70％时，可继续传代，传至第 三代终止。

2.根据权利要求1所述的脂肪干细胞，其特征在于用于治疗II型糖尿病。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于治疗II型糖尿病的脂肪干细胞溶液的浓度为1.0 ×10⁶个/公斤体重。