[发明专利]一种免疫细胞库的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫细胞治疗领域，尤其涉及一种免疫细胞库的构建方法。

背景技术

免疫细胞是指与免疫细胞应答有关的所有细胞，主要包括T细胞、B细胞、 自然杀伤细胞(NK)、单核细胞等。近年来肿瘤和病毒的免疫治疗技术已经进 入到临床应用，T细胞和NK细胞过继免疫疗法已列入我国三类医疗技术目录， 主要是通过自体的免疫细胞经体外刺激扩增培养，回输到患者体内提高免疫力。 通过直接或间接方式杀伤肿瘤细胞或病毒浸染的细胞，达到缓解或治疗病症的 目的。同时通过规模扩增储存，可实现与应用快速结合，提升应用效果。

NK细胞(naturalkillercell，自然杀伤细胞)是与T、B细胞并列的第三类 群淋巴细胞。NK细胞数量较少，在外周血、胎盘约占淋巴细胞总数的3-15％， 在脾内约有3％～4％。NK细胞作用机理(英国帝国理工学院)：自然杀伤细胞表 面有许多受体感应器，这些受体分为“激活”和“抑制”两种。当它在人体内 捕获1个可疑细胞后，2种受体将传回不同的信号，如果是病变细胞，“激活”信 号大大增强，免疫细胞的“杀手本能”将被激活，从而杀死病变细胞；反之， 如果捕获的是一个健康细胞，“抑制”信号将占主导地位，该细胞将会被释放。 目前，主要是肿瘤细胞、病毒感染细胞、较大的病原体(如真菌和寄生虫)、同种 异体移植的器官、组织等。

NK细胞过继免疫治疗主要是取自患者自己或半相合供体，由于其不存在体 细胞免疫抗原，自体及异体应用高安全性得到了国内外专家广泛认可，国外NK 细胞治疗小儿白血病已进入临床III期实验。抗肿瘤、抗病毒药物研发已进入IND 阶段。目前肿瘤治疗患者年龄不断提前，患者免疫系统机能已经遭受破坏，通 过多种途径规模制备自体或异体自然杀伤细胞，长期存储，不仅是我国三类医 疗技术对NK细胞应用控制和预防医疗模式的快速结合，也为NK细胞作为抗肿 瘤药物研究和细胞药物制备和临床应用准备了必备条件。所以通过NK细胞存 储与不同供体资源结合，可逐步提升免疫细胞预防医疗应用水平，也能为患者 临床应用提供创新方法，为免疫细胞药物开发提供了新的方式，所以通过不同 时期供体应用资源的NK细胞扩增存储，提升我国免疫细胞存储应用能力，提 升我国免疫细胞应用水平具有非常大的意义。

为了有效存储和使用组织和供体资源，目前在世界范围内已经有多种细胞 库和组织库建立，比如脐带造血肝细胞库、间充质干细胞库等细胞库。所谓细 胞库是在-196℃液氮中存储细胞及搜集相关资料的场所。免疫细胞库不仅可提高 现有建库资源的新应用，避免资源浪费，也能为以新药开发为需求的资源专属 体系提供技术和应用保障。

目前，要冻存免疫细胞，通常是直接冻存单个核细胞。由于人单核细胞成 分复杂，既有免疫细胞也有非免疫细胞，是多种类型细胞组合，导致冻存后的 单个核细胞复苏后活率不理想，不适合临床应用。对于免疫细胞尤其是NK细 胞的长期冻存及冻存治疗控制并无相关报道。

CN102758259A公开了一种人外周血免疫细胞库的构建方法，其采集人外周 血，分离自体血浆，分离外周血单个核细胞，由外周血单个核细胞分离单核细 胞并冻存，由外周血单个核细胞分离T淋巴细胞并冻存，由外周血单个核细胞 分离B淋巴细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离NK细胞并冻存，编码入库。 尽管该方法是采用将免疫细胞分离出并分别单独冻存，编码入库，然而，这些 免疫细胞进行冻存后，其活性大大降低，当再次将这些免疫细胞进行复苏时， 细胞的存活率大大下降，无法实现长期储存和即时应用，更不能作为种子细胞 循环扩增使用。

因此，寻找一种能够长期储存、并且保持免疫细胞复苏后高存活率即时应 用，同时可以以库存细胞为种子高效扩增循环应用的细胞库构建方法是目前亟 待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种免疫细胞库的构建方法，特别是一种利用人外周血、胎 盘组织血、胎盘组织以及脐带血等供体资源制备的适合临床应用免疫细胞库的 构建方法。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种免疫细胞库的构建方法，其包括：

(1)从供体资源分离单个核细胞；任选地，冻存单个核细胞；

(2)扩增培养，获得免疫细胞；

(3)将免疫细胞冻存，编码入库。