[发明专利]一种免疫细胞库的构建方法

权利要求书

1.一种免疫细胞库的构建方法，其特征在于，其包括：

(1)从供体资源分离单个核细胞；任选地，冻存单个核细胞；

(2)扩增培养，获得免疫细胞；

(3)将免疫细胞冻存，编码入库。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述供体资源为脐 带血、外周血、胎盘组织血或胎盘组织中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述分离包括：采用脐带血、外周血或胎盘组织血分离自体血浆， 分离得到单个核细胞，或者采用胎盘组织分离单个核细胞；

优选地，所述脐带血、外周血或胎盘组织血分离自体血浆包括：将采集的 脐带血、外周血或胎盘组织血离心，取上清液灭活，获得用于冻存和培养用自 体血浆；

优选地，所述胎盘组织分离单个核细胞包括：胎盘组织捣碎后，经酶消化， 过滤，加入淋巴细胞分离液，离心后，取中间层细胞即得到胎盘组织单个核细 胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述冻存单个 核细胞包括：将单个核细胞与冻存液混合并液氮保存；

优选地，所述单个核细胞的密度为0.1-1.5×10⁸/mL，优选为1×10⁸/mL；

优选地，所述冻存液按体积百分含量包括：10-90％的胎牛血清或自体血浆； 10-90％的基础培养基；进一步优选地，所述基础培养基为RPMI-1640或淋巴细 胞无血清培养基。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述扩增培 养包括：将单个核细胞进行接种并加入培养液进行培养；

优选地，所述单个核细胞的密度为0.5-2.5×10⁶/mL，优选为2×10⁶/mL；

优选地，所述培养液按体积百分含量包括：1％-15％的自体血清或胎牛血清； 85-99％的淋巴细胞无血清培养液或RPMI-1640培养液；200-500U/mL的重组人 IL-2；

优选地，所述免疫细胞为T细胞、NK细胞或NKT细胞中的任意一种或至 少两种的组合。

5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述免疫细 胞冻存包括：将免疫细胞与冻存液混合；

优选地，所述冻存液按体积百分含量包括：5-10％的二甲基亚砜；10-90％的 自体血清或胎牛血清；0-5％的人血白蛋白和5-75％的基础培养液；

优选地，所述基础培养液为淋巴细胞无血清培养液或RPMI-1640培养液；

优选地，所述免疫细胞的密度为2-10×10⁷个/mL，优选为5×10⁷个/mL。

6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)从脐带血、外周血、胎盘组织血或胎盘组织中分离单个核细胞；

(2)将得到的单个核细胞按照0.1-1.5×10⁸/mL的密度，混合在按体积百分 含量包括1％-15％的自体血清或胎牛血清；85-99％的淋巴细胞无血清培养液或 RPMI-1640培养液；200-500U/mL的重组人IL-2的培养液中，放入二氧化碳培 养箱中培养；

(3)将获得的免疫细胞按照2-10×10⁷个/mL的密度，混合在按体积百分含 量包括5-10％的二甲基亚砜；10-90％的自体血清或胎牛血清；0-5％的人血白蛋 白和5-75％的基础培养液的冻存液中，并将其编码入库；

任选地，在步骤(2)之前进行步骤(1^，)：按照0.1-1.5×10⁸/mL的密度，混 合在按体积百分含量包括10-90％的胎牛血清或自体血浆；10-90％的基础培养基 的冻存液中进行单个核细胞的冻存。