[发明专利]定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法

权利要求书

1.一种定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征在于，以糖基化蛋白标准品进行荧光速度传感-芯片超分子电泳测试，获得不同浓度糖基化蛋白与荧光传感硼酸探针结合后释放出的荧光素在电场下的对应不同迁移速率，构建出已知浓度糖基化蛋白与荧光素迁移速率之间的线性关系；然后采用相同的检测操作和检测条件利用荧光速度传感-芯片超分子电泳测试未知浓度糖基化蛋白，获得对应的荧光素在电场下的迁移速率，带入线性关系获得该糖基化蛋白的浓度；

所述的荧光传感硼酸探针F1@Rp3是指：40mM F1荧光素和40mM硼酸探针Rp3等体积混合所得到的20mM F1@Rp3溶液，其中：F1荧光素的化学结构为：硼酸探针的化学结构为：

2.根据权利要求1所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的糖基化蛋白包括：免疫球蛋白G、卵清蛋白及糖化血红蛋白。

3.根据权利要求1所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的线性关系是指：糖基化蛋白浓度xGP与荧光素迁移速率y之间的线性关系，即：y_GP＝axGP+b，其中：a和b均为针对不同类型的糖基化蛋白的常数。

4.根据权利要求1所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的糖基化蛋白标准品是指：浓度和种类已知的糖基化蛋白，浓度分别为0.2、0.5、1、2和5mg/mL。

5.根据权利要求1所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的荧光速度传感-芯片超分子电泳测试中施加的电场为66.7V/cm，采用的凝胶为聚丙烯酰胺凝胶，背景电解质溶液和电极缓冲溶液采用磷酸盐缓冲溶液。

6.根据权利要求5所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的聚丙烯酰胺凝胶，重量体积浓度为15％，交联度为4％。

7.根据权利要求5所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的电极缓冲液的离子强度和凝胶中的背景电解质溶液的离子强度相同，均为20mM pH 7.4。

8.根据权利要求1所述的定量检测糖基化蛋白的荧光速度传感方法，其特征是，所述的荧光速度传感-芯片超分子电泳测试，包括以下步骤：

i)将样品与聚丙烯酰胺凝胶一起灌注到毛细管中进行凝胶处理，然后在每根毛细管一端注入荧光传感硼酸探针后，将毛细管依次陈列到芯片超分子电泳装置中，且上样端置于电泳装置的阴极端；

ii)将芯片超分子电泳装置置于荧光显微镜下，施加电场后，通过光学设备捕获释放出的F1，并生成一系列荧光成像图片，再通过图像处理得到F1在电场下的平均迁移速率。