[发明专利]一种长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物快速繁殖技术领域，尤其涉及一种长筒石蒜组织培养得 到再生植株的方法。

背景技术

近年来市场上对石蒜属植物的需求量日益增加，但石蒜有性杂交结实率 (禾谷类作物饱满谷粒占颖花总数的百分率)很低，大部分是花而不实；其自 然分球繁殖系数低、速度慢，因而石蒜的快速繁殖技术成为迫切需要解决的 问题。

目前对石蒜组织培养的研究较多，但一般以其鳞茎等为外植体，通过器 官发生途径获得再生植株，但是这种方法的诱导率较低，一般不足50％。目 前，还没有利用石蒜的种子胚或花朵为外植体诱导愈伤组织获得完整植株的 技术。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述问题，提供一种长筒石蒜组织培养得 到再生植株的方法，利用石蒜种子胚或花朵为外植体诱导愈伤组织获得完整 植株，诱导率高。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法，主要包括以下步骤：

步骤1、以长筒石蒜的种子胚或花朵为材料诱导出愈伤组织；

步骤2、将愈伤组织顺次进行不定芽诱导培养以及生根诱导培养，即得 到长筒石蒜再生植株。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，步骤1中， 诱导愈伤组织所用培养基为愈伤组织诱导培养基，所述愈伤组织诱导培养基 主要成分为：MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，所述愈伤 组织诱导培养基蔗糖浓度为30-38g/L、琼脂6.9-7.5g/L，pH值调为5.5-6.0。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，所述愈伤 组织诱导培养基蔗糖浓度为35g/L、琼脂7.1g/L，pH值调为5.8。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，以长筒石 蒜的种子胚为材料诱导愈伤组织，具体的操作方法包括以下步骤：

步骤1.1.1、种子无菌材料的制备，将长筒石蒜种子顺次进行以下操作： 流水冲洗1-2h；用质量浓度为73-78％乙醇溶液浸泡1-3min；无菌双蒸水冲 洗2-5次，每次10-30s；质量浓度为0.08-0.3％的HgCl₂浸泡10-20min；无菌 双蒸水清洗2-5次，得种子无菌材料；

步骤1.1.2无菌操作取出所述种子无菌材料中的完整种胚，即得种子胚；

步骤1.1.3将所述种子胚接种于所述愈伤组织诱导培养基上；

步骤1.1.4进行暗培养，培养温度25±1℃，培养时间5-25d，即得所述 愈伤组织。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，以长筒石 蒜的花朵为材料诱导愈伤组织；具体的操作方法包括以下步骤：

步骤1.2.1、花朵无菌材料的制备，将长筒石蒜花朵顺次进行以下操作： 流水冲洗1-2h；取花朵的花被片、花丝或花茎，并切成4-6mm×4-6mm的小 块，用质量浓度为73-78％乙醇溶液浸泡1-3min；无菌双蒸水冲洗2-5次，每 次10-30s；质量浓度为0.08-0.3％的HgCl₂浸泡10-20min；无菌双蒸水清洗2-5 次，得花朵无菌材料；

步骤1.2.2将所述花朵无菌材料接种于所述愈伤组织诱导培养基上；

步骤1.2.3进行暗培养，培养温度25±1℃，培养时间5-25d，即得所述 愈伤组织。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，步骤2中 诱导不定芽采用不定芽诱导培养基，所述不定芽诱导培养基的主要成分为： MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L；

不定芽诱导培养的温度为25±1℃，自然光照培养，培养时间5-25天。

优选的是，所述的长筒石蒜组织培养得到再生植株的方法中，步骤2中 生根诱导采用生根诱导培养基，所述生根诱导培养基的主要成分为：MS+ NAA0.2mg/L；

生根诱导不定芽诱导培养的温度为25±1℃，自然光照培养，培养时间 5-25天。