[发明专利]多功能荧光蛋白纳米线及其介导的免疫分析方法

权利要求书

1.一种多功能荧光蛋白纳米线，包括蛋白纳米线以及连接在蛋白纳米线外侧 的荧光分子，其中，所述蛋白纳米线通过成线蛋白自组装形成，至少一个所述荧 光分子表面连接功能配体，至少一个所述荧光分子表面未连接功能配体。

2.如权利要求1所述的多功能荧光蛋白纳米线，其特征在于：所述成线蛋白 为酵母朊蛋白，所述荧光分子为绿色荧光蛋白，所述功能配体为生物素，所述绿 色荧光蛋白表面通过遗传修饰连接生物素。

3.如权利要求1或2所述的多功能荧光蛋白纳米线，其特征在于：表面连接 功能配体的荧光分子位于靠近蛋白纳米线端部的位置，且其数量小于表面未连接 功能配体的荧光分子的数量。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的多功能荧光蛋白纳米线的制备方法，包 括如下步骤：

(1)通过分子克隆将成线蛋白的自组装结构域与荧光分子融合形成融合蛋 白基因LP-FP；

(2)通过分子克隆将成线蛋白自组装结构域与荧光分子融合后，在荧光分 子末端连接功能配体，形成融合蛋白基因LP-L；

(3)将步骤(1)和步骤(2)得到的融合蛋白基因LP-FP及LP-L分别经 表达纯化得到融合蛋白LP-FP及LP-L；

(4)将步骤(3)得到的融合蛋白LP-FP及LP-L通过自组装形成多功能荧 光蛋白纳米线。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述成线蛋白为酵母朊蛋白， 所述荧光分子为绿色荧光蛋白，所述功能配体为生物素，所述绿色荧光蛋白表面 通过遗传修饰连接生物素，所述多功能荧光蛋白纳米线的制备包括如下步骤：

(1)通过分子克隆将酵母朊蛋白的自组装结构域与绿色荧光蛋白融合形成 融合蛋白基因Sup35-GFP；

(2)通过分子克隆将酵母朊蛋白的自组装结构域与绿色荧光蛋白融合后， 在绿色荧光蛋白C端连接生物素接受多肽BAP，形成融合蛋白基因Sup35-BAP；

(3)将步骤(1)和步骤(2)得到的融合蛋白基因Sup35-GFP和Sup35-BAP 分别经表达纯化得到融合蛋白Sup35-GFP及生物素化的Sup35-BAP蛋白；

(4)将步骤(3)得到的融合蛋白Sup35-GFP及生物素化的Sup35-BAP蛋 白通过自组装形成多功能荧光蛋白纳米线。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中融合蛋白 基因Sup35-BAP经表达纯化后得到生物素化的Sup35-BAP蛋白具体包括：

将融合蛋白基因Sup35-BAP克隆入表达载体，将生物素蛋白连接酶克隆入 共表达载体中；

将所述表达载体、共表达载体转入表达宿主中培养，活化至对数生长期后 加入诱导表白蛋白和生物素；

经破碎、纯化后制得生物素化的绿色荧光蛋白。

7.如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中将融 合蛋白Sup35-GFP及生物素化的Sup35-BAP蛋白通过自组装形成多功能荧光蛋 白纳米线具体包括：

将融合蛋白Sup35-GFP置于4℃下孵育一周后，形成纳米线，通过超声将 纳米线破碎为纳米线片段，制备Sup35-GFP种子；

将制备好的Sup35-GFP种子与融合蛋白Sup35-GFP按照摩尔比为1:1-16混 合，于4℃下孵育6-10小时，进行种子诱导自组装；

将反应产物与生物素化的Sup35-BAP蛋白按摩尔比为1:1-4混合后，4℃下 离心、重悬得到多功能荧光蛋白纳米线。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述Sup35-GFP种子与融 合蛋白Sup35-GFP按照摩尔比为1:2-8混合，优选为1:4混合；和/或，

将反应产物与生物素化的Sup35-BAP蛋白按摩尔比为1:1混合，4℃下离心 5-15min，优选离心10min，重悬得到多功能荧光蛋白纳米线。