[发明专利]一种止痛贴剂的指纹图谱及其质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测领域，尤其是涉及一种中成药的高效液相色谱检测。

背景技术

消肿止痛贴是以地方药材沙蒿子为主要原料药的外用贴剂，经动物实验和多年临床使用验证，疗效确切，具有非常好的消炎止痛功效。临床用于疖疮初起，关节肿痛的辅助治疗。自该品种上市以来，经过不断地技术升级，在产品品质和生产工艺方面都得到了大幅度地改进。

但是对于该产品的质量控制方面，缺乏系统地研究和统一的、适用于工业生产的标准。张媛媛等人曾经研究沙蒿子的指纹图谱条件(张媛媛，乔延江，HPLC法测定沙蒿子种子中两种二氢黄酮的含量，北京中医药大学学报，2008，31(1)：58～60.)。但是按照其条件检测消肿止痛贴中的沙蒿子有效成分时，发现其峰型很差，分离度不好，达不到中国药典要求，不利于企业大生产适用。李莎莎等研究了沙蒿子中有效成分的含量测定，但其采用的是等度洗脱，不能满足指纹图谱检测的要求。(李莎莎，史新元，展晓日等，沙蒿子子中总黄酮及圣草酚-7-甲醚、异樱花素的含量测定，中华中医药杂志，2009,24(9):1223～1225.)

因此，需要提供一种新的检测方法，能同时满足沙蒿子种子中多种有效成分的含量测定和指纹图谱检测。

发明内容

为了解决上述至少一个技术问题，本发明提供了一种消肿止痛贴剂有效成分的测定方法。

本发明提供的测定方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：称取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品，加乙醇制得混合对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备：取消肿止痛贴的药贴，粉碎，过筛，加入乙醇溶液，提取20-50min，放至室温，加入乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，蒸干，残渣加入乙醇溶解，摇匀即得供试品溶液。

(3)测定法：吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，高效液相色谱仪的色谱条件如下：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，

流动相：乙腈-0.2％甲酸为流动相，进行梯度洗脱，梯度程序如下表

流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温30-40℃，

检测波长：290±3nm。

本发明所选择的流动相和洗脱梯度是经过实验验证的，和现有技术比较，能够同时满足消肿止痛贴剂中指纹图谱检测和两种黄酮类有效成分的含量测定。

根据本发明实施方式之一，步骤(1)中混合对照品溶液中圣草酚-7-甲醚和异樱花素的浓度分别为40μg/ml和20μg/ml。

根据本发明实施方式之一，洗脱梯度程序可以为：0～10min,乙腈12％；10～15min,乙腈12％～16％；15～30min,乙腈16％；30～65min,乙腈16％～30％；65～80min,乙腈30％～35％；80～110min,乙腈35％。也就是采用如下表所示的洗脱梯度。

根据本发明实施方式之一，乙醇的浓度为55～85％。

根据本发明实施方式之一，乙醇的浓度优选为80％。

根据本发明实施方式之一，步骤(2)中所述药贴经粉碎、过筛后加入乙醇，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g。

根据本发明实施方式之一，步骤(2)中提取方法为超声提取或加热回流提取。

根据本发明实施方式之一，步骤(2)中提取方法为超声提取25～35min。进一步地，超声功率可以为500W，频率为40kHz。

根据本发明实施方式之一，色谱柱可以为Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱。

根据本发明实施方式之一，柱温优选35℃。

根据本发明实施方式之一，流动相的流速优选1ml/min。

根据本发明实施方式之一，检测波长为290nm。

本发明还提供了一种消肿止痛贴剂高效液相指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：称取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品，加入浓度为55～85％的乙醇制得混合对照品溶液。