[发明专利]一种万古霉素培养基及制备万古霉素的方法

说明书

本发明公开了一种万古霉素培养基及制备万古霉素的方法，包括如下重量份数的组分：碳源 1.5‑5份；氮源 0.05‑0.15份；无机盐 0.15‑0.45份；水 90‑110份无机盐包括硫酸镍、硝酸铁和氯化钠，按照重量份，硫酸镍：硝酸铁：氯化钠=0.5‑2:0.5‑2:1。本发明的有益效果：提高万古霉素的收率和纯度。

技术领域

本发明涉及药物生产领域，特别涉及一种万古霉素培养基及制备万古霉素的方法。

背景技术

近年来，由于青霉素的广泛的运用造成了大量的青霉素抗性革兰氏阳性感染，万古霉素就成为了对细菌作战的最后的防线。随着万古霉素的需求的增加，如何改进现有的万古霉素生产工艺提升万古霉素的产量便成为研究的热点。

在现有的万古霉素的生产工艺中，普遍采用控制放线菌属东方拟无枝酸菌在发酵条件下产生万古霉素，再经过分离纯化后得到万古霉素纯品的方法。由此可见，万古霉素的发酵步骤在整个生产工艺中对产量能够产生至关重要的影响。因此如何改进现有的发酵工艺便成为如何提升万古霉素产量的重点。

而在现有的发酵工艺中，培养基对发酵过程起着关键的作用。在现有菌种的情况下，万古霉素的产量和质量的提高，只能通过工艺的优化从而改变产量及质量。而培养基的优化也就成为重点的研究对象。

发明内容

本发明的目的是提供一种万古霉素培养基，该培养基能够显著提高万古霉素在发酵步骤的收率。本发明的另一个发明目的是提供一种制备万古霉素的方法。该方法应用万古霉素培养基，从而提高万古霉素的收率和纯度。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种万古霉素培养基，其特征是：包括如下重量份数的组分：

所述无机盐包括硫酸镍、硝酸铁和氯化钠，按照重量份，硫酸镍∶硝酸铁∶氯化钠＝0.5-2∶0.5-2∶1。

还包括重量份为0.04-0.06份的pH调节剂，所述pH调节剂包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，按照摩尔比，磷酸二氢钠∶磷酸氢二钠＝0.15-0.19∶1。

还包括甘氨酸、色氨酸、酪氨酸组成的重量份为0.05-0.1份的氨基酸复合物，按照重量份，甘氨酸∶色氨酸∶酪氨酸＝3-8∶1∶3-5。

所述碳源选自可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糖中的一种。

所述氮源由尿素、棉籽饼粉和乙酸铵混合而成，按照重量份，尿素∶棉籽饼粉∶乙酸铵＝3-5∶1∶2-4。

一种应用万古霉素培养基的万古霉素制备方法，包括如下步骤：摇瓶种子接种、种子罐万古霉素培养基培养、发酵罐万古霉素培养基培养、预发酵液预处理、陶瓷膜过滤、一次纳滤、草酸沉淀、一次板框过滤、一次过柱纯化、二次纳滤、一次结晶、二次板框过滤、活性炭脱色、脱色板框过滤、二次过柱纯化、超滤、三次纳滤、二次结晶、真空抽滤、晶体溶解、冷冻干燥、打粉包装，其中

①发酵液的预处理：按照发酵液体积的0.1-0.5％往万古霉素发酵液加入质量分数为10-20％的盐酸进行成盐，搅拌30min得到预处理液；

②草酸沉淀：将一次纳滤得到的浓缩液加入草酸沉淀罐，再加入一次纳滤得到的浓缩液重量的0.001-0.004％的固体草酸钠，搅拌30-50min后静置；

③活性炭脱色：将二次板框过滤得到的一次结晶体加入活性炭脱色罐，加入去离子水溶解，搅拌并加热，待一次结晶体的溶液沸腾时加入一次结晶体重量的3-6％的活性炭进行脱色30min。

所述板框过滤中，过滤介质为滤板，所述滤板上预涂有2mm的助滤剂，所述助滤剂为活性炭。