[发明专利]一种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及中药材检测方法，具体涉及中药材金银花和山银花的检测方法。

背景技术

金银花为忍冬科(Caprifoliaceae)植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花，原产于亚洲东部，包括中国、日本、韩国。金银花具有清热解毒、凉散风热及抗菌消炎等功效，被广泛用于治疗痈、急性痢疾、咽炎以及由病毒或细菌感染引发的上呼吸道系统疾病。此外，金银花还具有抗菌、抗炎及抗病毒(如：甲型H1N1流感病毒)等药理作用。双黄连口服液是一种传统的复方中药，金银花作为其主要原料之一，主要用于治疗上呼吸道感染、急性支气管炎以及轻度肺炎。金银花还广泛应用于食品、饮料以及其他相关产品。因此，金银花获得了广泛的关注和市场需求，其结果不可避免的是市场上发现了大量金银花掺假产品，主要是掺入不同种类的山银花。山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、华南忍冬Lonicera confusa DC.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.或黄褐毛忍冬Lonicera fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或带初开的花，摘自《中国药典》。虽然这两种草药外观形态和化学成分不同，但其药材特性和适应症类似。按《中国药典》采用高效液相色谱法测定，山银花含绿原酸(C16H18O9)不得少于2.0％，含灰毡毛忍冬皂苷乙(C65H106O32)和川续断皂苷乙(C53H86O22)的总量不得少于5.0％。金银花含绿原酸(C16H18O9)不得少于1.5％，含木犀草苷(C21H20O11)不得少于0.050％。绿原酸(3-O-咖啡酰奎宁酸)是金银花中的主要化合物，可作为重要的标志物用于检测。大量研究表明，绿原酸有潜在的抗炎、镇痛、退热、抗诱变和抗癌活性[3]。文献报道，HPLC法与UV-LESD[4]或者MS[5]联用可用于分析金银花的活性成分。然而，这些方法不仅分析时间长，而且需使用大量有机溶剂作为流动相。目前，尚未发现有相对LC更简便的方法可从金银花中区分出山银花，尤其是RRLC法。

发明内容

本发明的任务是提供一种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法。

实现本发明的技术方案是:

本发明提供的这种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法，其特征在于，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相B对待检药材样品检测。该方法的色谱条件为：柱温为40℃，流速为1.0ml/min，进样量为1μl，按下表进行梯度洗脱:

检测波长为327nm(0～3min)、350nm(3～5min)，用蒸发光散射检测器检测皂苷类化合物(5～8min)。

本发明提供的这种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法，包括制备待测样品溶液、色谱检测、结果判断三个步骤，各步骤的具体方法是：

步骤一、制备待测样品溶液：取待测样品，用研钵磨成细粉，取细粉0.10g，精密称定，然后加70％甲醇水溶液10ml，并在37℃超声处理15min，超声处理后，放冷至室温，用70％的甲醇水溶液调整至10ml，制得待测样品溶液；

步骤二、色谱检测：

取待测样品溶液用0.20μm的滤膜过滤，取1μl进样，记录色谱，

色谱条件为：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Luna C18-HST(2)柱(2.5μm,100mm×3.0mm))；

以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相B，柱温为40℃；

流速为1.0ml/min；

进样量为1μl；梯度洗脱见表1。

表1梯度洗脱

检测波长为327nm(0～3min)、350nm(3～5min)，用蒸发光散射检测器检测皂苷类化合物(5～8min)；

步骤三、结果判断：将所得色谱图与金银花及山银花指纹图谱比较，主峰即为绿原酸，金银花及山银花都有此主峰，所述的主峰具体为2.295min处的色谱峰；6min处出现两个色谱峰即判断样品为山银花，具体是6.021min和6.341min处有两个色谱峰即判断样品为山银花，此两个色谱峰分别为灰毡毛忍冬皂苷乙峰和川续断皂苷乙峰。6min处无特征色谱峰即判断样品为金银花。