[发明专利]一种快速区分乳酸菌菌种的方法在审
| 申请号： | 201610044832.2 | 申请日： | 2016-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN105567787A | 公开（公告）日： | 2016-05-11 |
| 发明（设计）人： | 黄艳娜;李楠;游春苹;刘振民 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/52 | 分类号： | C12Q1/52;C12Q1/32;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 朱水平;沈利 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 区分 乳酸菌 菌种 方法 | ||
1.一种快速区分乳酸菌菌种的方法，其特征在于，所述方法包括以下 步骤：
(1)将待检乳酸菌菌种的培养液离心，取上清稀释20-25倍，得稀释培 养液上清；
(2)用D-乳酸脱氢酶和L-乳酸脱氢酶按如下表1所示体系分别与步骤 (1)所述稀释培养液上清进行反应：
表1乳酸测定的反应体系
其中，所述稀释培养液上清、水、双甘氨肽缓冲液、NAD+与D-谷氨酸 -丙酮酸转氨酶在加入D或L-乳酸脱氢酶前混合，混合时间为2-4min，然后 读取吸光值A1，然后加入D-乳酸脱氢酶或L-乳酸脱氢酶反应，反应时间为 4-6min，然后读取溶液吸光值A2；
(3)分别计算步骤(2)中所述对照和所述样品的吸光值变化值A2-A1， 将所述样品的吸光值变化值减去所述对照的吸光值变化值得ΔAD-乳酸或ΔAL-乳酸；将所得ΔAD-乳酸或ΔAL-乳酸代入以下公式，计算得到步骤(1)所述待检乳 酸菌菌种的D-乳酸或L-乳酸浓度：
其中，V为终体积，单位为mL；MW为乳酸的分子量，单位为g/mol； ε为340nmNADP的消光系数；d为光路，单位为cm；v为样品体积，单位 为mL；根据得到的所述待检乳酸菌菌种的D-乳酸和L-乳酸的浓度的比值对 所述待检乳酸菌菌种进行区分。
2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中所述待检乳酸菌 菌种的培养液通过在培养基中培养获得。
3.如权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养基为MRS液体培养 基。
4.如权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养的温度为37℃；和/ 或，所述培养的时间为36-48小时；和/或，所述培养的方法为静置培养。
5.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中，取上清稀释20 倍。
6.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述双甘氨肽 缓冲液的浓度为0.5mol/L。
7.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述双甘氨肽 缓冲液的pH值为8.9。
8.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合时间 为2分钟。
9.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述反应时间 为5分钟。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于光明乳业股份有限公司，未经光明乳业股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201610044832.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
