[发明专利]一种3‑氨基哌啶异构体的HPLC检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基哌啶异构体的HPLC检测方法。

背景技术

(R)-3-氨基哌啶是Ⅱ型糖尿病新药利拉利汀、阿格列汀的重要中间体。利拉利汀、阿格列汀分子结构中只有一个手性中心，由中间体(R)-3-氨基哌啶引入，因此 (R)-3-氨基哌啶的光学纯度直接决定了利拉利汀、阿格列汀的光学纯度和药效。

王灿辉等（CN103435538 B）采用3-氨基哌啶的1,3位氮上分别用叔丁氧羰基取代，采用chiralpark AD-H 4.6×250手性色谱柱在215nm对其进行分析，流动相为正己烷，流速1.0 mL/min，保留时间未报道。孙凤霞等(CN104007202A CN104034814A)采用苯甲酰氯为衍生化试剂对3-氨基哌啶分别进行单衍生化和双衍生化，使用CHIRAL-AGP(150×4.6mm)手性柱，在254nm下对衍生物进行分析。Watanabe等人（Tetsuya Assignee Sumitomo Chemical Co.,Ltd., Japan 2009）采用氯甲酸丙酯为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生，采用CHIRALCEL AS-RH (150×4.6mm) 手性柱在254nm下对衍生物进行分析，其流动相组成为70:30（V:V）的水:乙腈，流速1.0mL/min，(S)-衍生物19.1min出峰，(R)-衍生物31.5min出峰。所需检测时间过长及手性柱价格昂贵。Meek等(WO2011160037)采用Crownpak^TM CR+(150×4.6 mm)手性柱，示差折光检测器直接对3-氨基哌啶进行检测，其流动相为95:5（V:V）的HClO₄ (pH=1) : MeOH，柱温0℃，流速0.6mL/min，(S)-3-氨基哌啶3.0min出峰，(R)-3-氨基哌啶3.7min出峰。但实际上示差折光检测器对分析的样品量要求很大，误差大，手性柱价格昂贵。。而通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速衍生化，得到既有紫外吸收又形成两个手性基团的衍生物，能够直接在反相高效液相与紫外联用上进行异构体的分析。

相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定性。但由于3-氨基哌啶及其手性异构体紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，采用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度，再通过反相液相色谱进行分析检测。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种3-氨基哌啶异构体的HPLC检测方法，使用普通C18柱，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种3-氨基哌啶异构体的HPLC检测方法，具体包含如下步骤：

步骤一、衍生化

将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯为衍生化试剂，控制3-氨基哌啶和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行单衍生化反应，得到衍生化后的3-氨基哌啶，反应式见式I；

步骤二、分离检测

采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基哌啶进行定性、定量和对映体过量率测定。

所述的有机溶剂选自氯仿、四氯化碳、石油醚、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷和己烷中的一种或两种以上的组合。

所述的有机溶剂与3-氨基哌啶的体积比为1~300:1，优选的为5~20:1。

所述低温条件下指反应温度为-20℃~20℃，优选的为-5℃~5℃。

所述的3-氨基哌啶和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:0.5~1。

所述的紫外检测器的检测波长为210~300nm，优选220~260nm。

所述的所述的高效液相使用的色谱柱是普通反相柱，优选的色谱柱为反相C18柱。

所述的反相高效液相色谱的流动相由缓冲盐溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、四氢呋喃、丙酮和乙腈中的一种或两种以上；有机溶剂占流动相的体积比例范围为20%~80%，优选30%~50%。

所述的流动相缓冲盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾中的一种或两种，所述缓冲盐溶液的质量体积浓度为0.01%~10%，优选0.1%~1%。