[发明专利]一种3‑氨基哌啶对映异构体过量率的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基哌啶对映异构体过量率的测定方法。

背景技术

3-氨基哌啶虽然分子结构中有两个氮原子，但由于氮原子的孤对电子能量较低，所以3-氨基哌啶在紫外区几乎无吸收，因此采用传统的HPLC-UV方法对3-氨基哌啶进行准确可靠的定性和定量就变得无力。

王灿辉等（CN103435538 B）采用3-氨基哌啶的1,3位氮上分别用叔丁氧羰基取代，采用chiralpark AD-H 4.6×250手性色谱柱在215nm对其进行分析，流动相为正己烷，流速1.0 mL/min，出峰时间未报道。Meek等(WO2011160037)采用CrownpakTM CR+(150×4.6mm)手性柱，示差折光检测器直接对3-氨基哌啶进行检测，其流动相为95:5（V:V）的HClO₄ (pH=1) : MeOH，柱温0℃，流速0.6mL/min，(S)-3-氨基哌啶3.0min出峰，(R)-3-氨基哌啶3.7min出峰。但实际上示差折光检测器对分析的样品量要求很大。Watanabe等人（Tetsuya Assignee Sumitomo Chemical Co.,Ltd., Japan 2009）采用氯甲酸丙酯为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生，采用CHIRALCEL AS-RH (150×4.6mm)手性柱在254nm下对衍生物进行分析，其流动相组成为70:30（V:V）的水:乙腈，流速1.0mL/min，(S)-衍生物19.1min出峰，(R)-衍生物31.5min出峰。孙凤霞等(CN104007202A CN104034814A)采用苯甲酰氯为衍生化试剂对3-氨基哌啶分别进行单衍生化和双衍生化，使用CHIRAL-AGP(150×4.6mm)手性柱，在254nm下对衍生物进行分析。

3-氨基哌啶是利拉利汀的重要中间体，建立并确定3-氨基哌啶的定性、定量以及对应异构体的分离检测方法对3-氨基哌啶的检测和监测具有重要意义。HPLC检测法具有检测灵敏度高、精确度高，检测所需时间少，检测结果重复性高等优点，是当前分析化学中常用检测手段。

相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定性。但由于3-氨基哌啶及其手性异构体紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，通常采用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度。而通过与带紫外吸收的手性试剂进行选择性衍生化，得到既有紫外吸收又带有两个手性基团的衍生物，直接在反相高效液相上进行对应体过量率的分析。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种3-氨基哌啶对映异构体过量率的测定方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种3-氨基哌啶对映异构体过量率的测定方法，具体包含如下步骤：

步骤一、衍生化

将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在低温条件下，以(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯为衍生化试剂，控制3-氨基哌啶和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的摩尔比，进行单衍生化反应，得到衍生化后的3-氨基哌啶，反应式见式I；

式I

步骤二、分离检测

采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基哌啶进行定性、定量和对映体过量率测定。

所述的有机溶剂选自石油醚、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷和己烷中的一种或两种以上的组合。

所述的有机溶剂与3-氨基哌啶的体积比为5~400:1，优选的体积比范围为5~30:1。

所述的低温条件是指从-20℃~20℃，优选-5℃~5℃。

所述的3-氨基哌啶和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的摩尔比为1:0.5~1，优选的摩尔比是1:1。

所述的紫外检测器的检测波长为220~300nm，优选230~260nm。

所述的反相高效液相色谱的色谱柱是普通反相柱，优选的色谱柱为反相C18柱，最优的为迪马反相C18柱（250×4.6mm，5μm，pH范围2.0~8.0）。

所述的反相高效液相色谱的流动相由水和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种；有机溶剂占流动相的体积比例范围为50%~100%，优选的范围为60%~80%。