[发明专利]O型口蹄疫病毒抗体检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测卡，特别是涉及一种用于快速定量检测猪血清中O型口蹄疫病毒抗体的检测卡及其制备方法。

背景技术

口蹄疫（Foot-and-MouthDisease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-MouthDiseaseVirus，FMDV）引起的偶蹄动物(猪、牛、羊、骆驼等)共患的一种急性、热性、高度传染性疫病，其特征是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房等发生水泡，并溃痒形成烂斑。该病传播途径多、速度快，流行区域广，能造成巨大的政治、经济损失，世界动物卫生组织(OfficeInternationaldesEpizooties，OIE)将其列为A类动物疫病。我国政府也将其排在14个一类动物传染病的第一位。目前，大部分OIE成员国都流行FMD，这不仅制约了畜牧业的发展而且还造成畜产品进出口市场的关闭和消费者的恐慌。FMD已经时刻威胁着那些无FMD国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。例如，2001年英国暴发FMD时（O型泛亚毒株入侵所致），仅短短的7个月内就造成高达30亿英镑的政府损失和50亿英镑的私人损失。

口蹄疫由口蹄疫病毒引起，口蹄疫病毒为小RNA病毒科（Picornaviridae）口蹄疫病毒属（Aphthovirus）的成员。口蹄疫病毒基因组为单股正链RNA，约由8500个核苷酸组成。病毒衣壳由4种结构蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成，其中VP1是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒共有7个血清型：O、A、C、Asia-I、SAT1、SAT2和SAT3型。目前7个口蹄疫病毒型中O型的流行最为广泛（世界范围内），其次为Asia-I型和A型；C型和南非三型非常罕见，通常只在特定区域流行。

O型口蹄疫的防控主要是疫苗免疫及屠宰感染和可疑畜群，而疫苗免疫动物与感染动物体内都会产生结构蛋白抗体，因此检测结构蛋白抗体的诊断方法能确定动物对病毒株的抵抗力。同时日常监测疫苗产生抗体对于养殖场来说，对群体的日常监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映饲养场管理是否合理，也是适时注射疫苗的主要依据。

市面上有O型口蹄疫病毒抗体胶体金快速检测卡，通过对样品的检测，即可粗略判断猪体内是O型口蹄疫抗体含量，兽医根据检测结果判断是否需要注射O型口蹄疫疫苗。

同样市场上也大量使用检测O型口蹄疫抗体酶标试剂盒，即液相阻断ELISA酶标试剂盒，ELISA试剂盒需要酶标仪、温育反应条件、洗板条件，操作工作环境和专业技术人员，另外检测样本还需要复杂的前处理，如采集血液，分离血清等；而快速胶体金虽然检测方便，不需专业技术人员和工作环境，但其检测的灵敏度低，且只能定性，检测范围窄。而本发明专利的目的就是克服以上两类试剂盒的各自缺点，通过简单的操作，现场快速、准确、高灵敏地定量（半定量）分析，实现在养猪现场检测。

发明内容

本发明的目的就是提供一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡及其制备方法，能完全解决上述现有技术的不足之处。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：

一种O型口蹄疫病毒抗体检测卡，包括装配在外壳内的检测卡本体，所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述标记垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球，且检测微球和质控微球的粒径均为50～500nm，所述硝酸纤维素膜上包被O型口蹄疫抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。

作为优选，所述底板为PVC底板,在PVC底板上从左至右依次粘贴样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，且样品垫的右端搭在标记垫的左端上，标记垫的右端搭在硝酸纤维素膜的左端上，吸水纸左端搭在硝酸纤维素膜的右端上。

作为优选，所述检测微球为标记有O型口蹄疫抗原的微球，质控微球为标记有鸡lgY或兔lgG的质控微球。

作为优选，所述硝酸纤维素膜上的检测线和标记垫上采用的O型口蹄疫抗原均为灭活O型口蹄疫病毒抗原、O型口蹄疫疫苗或O型口蹄疫结构蛋白VP1、VP2和VP3的重组蛋白；所述硝酸纤维素膜上质控线采用的羊抗鸡抗体为羊抗鸡lgY的lgG或者羊抗兔lgG。

作为优选，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球。